作者LIAR (玻璃做的大叔)
看板Biotech
标题[讨论] western blot的大片不均匀背景来源
时间Sun Jan 19 20:48:34 2014
我之前有找过western背景的讨论,有像是blocking不全、没溶完、wash不好等等
而我目前做过一个小测试。
ECL的操作:把ECL的液滴丢在塑胶盘上,把膜丢进去泡几十秒,然後翻面两次,就
放到黑色塑胶盘拿进UVP,没有盖投影片。
http://i1109.photobucket.com/albums/h424/LIAR2K/Clipboard_zps3b211291.gif
这是同一组4片膜,用UVP拍三次(上到下),最上面很明显左边有黑边,然後我拿出来
加ECL,再继续拍,结果是中间的结果,左上的黑区块不一样。
最後.....我啥也没做,连UVP的门都没开,继续用UVP再拍一次,结果就是最下面
的结果,感觉就均匀多了。
看来ECL确实有影响,至少其他变因都是固定的,但还是有两个问题我不懂:
1.如果拿出来看ECL的分布,和背景的黑白没有相关性,并非ECL聚集的地方
背景就高。很久之前我也有做过盖投影片的测试,好像也没影响。
2.如果ECL分布有影响,中间和下面的结果应该要一致,但是重拍却变比较均匀了,
似乎也说不过去。
之後几次我把膜摆到盘子上面後,会把ECL继续滴到膜上,变成上面都有一层ECL,
背景就很一致,拍起来很漂亮,当然次数不够多所以不敢保证,我想请问各位
对於这种不均匀的背景有甚麽经验是哪里造成的吗?
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起初,他们追杀共产主义者,我没有说话,因为我不是共产主义者;
接着,他们追杀犹太人,我没有说话,因为我不是犹太人;
後来,他们追杀工会成员,我没有说话,因为我不是工会成员;
此後,他们追杀天主教徒,我没有说话,因为我是新教教徒;
最後,他们奔我而来,却再也没有人站起来为我说话了。
《First They Came(他们首次来时)》,Martin Niemoller牧师(1892-1984)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 180.176.42.46
1F:→ blence:你有更完整的叙述如ECL牌子,incubation time,expose time 01/20 03:36
2F:→ blence:甚至是UVP setting等资讯吗? 01/20 03:38
3F:→ blence:像是放几十秒?? 目前这样我觉得1比较好,但条件似乎不太好 01/20 03:41