作者chang0115 (OPPA)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质萃取 去除DNA
时间Thu Oct 31 11:30:50 2013
最近在萃取Taq DNA polymerase
表现用的菌株是rosetta
萃取方式为破菌>75度C 水浴 30分钟>离心>取上清液>加storage buffer save
使用的破菌buffer是
Buffer A: 50mM Tris-HCl, pH 7.9, 50 mM dextrose, 1mM EDTA, 4 mg/ml lysozyme
Buffer B: 10 mM Tris-HCl, pH 7.9, 50mM KCl, 0.5% Tween-20, 0.5% NP-40
但是最终发现有DNA contamination,有试过用sonication方式
但PCR时还是有产物出现(在没加template的情形)
现在想利用DNase於破菌完的步骤进去作用,EDTA会拿掉,改用PMSF
想请问在buffer A, B的环境下,DNase会作用的好吗?
有查到DNase在高盐度环境下活性会降低
是否有更好的办法去除DNA呢?
感谢大家耐心阅读与解答
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 42.66.47.117
1F:推 jason0919:去除EDTA後 请加5mM MgCl2, DNase I才会有效果 11/01 12:05
2F:→ jason0919:稍微shaking 15min 11/01 12:07