※ 引述《martyrtitan (Martyrs)》之铭言： : ※ 引述《LIAR (玻璃做的大叔)》之铭言： : : 我用sigma D4527，应该有更便宜的。 : : 我觉得经验比你算半天还有用，如果过程没有伤到太多，我有遇过不加都可以过40um， : : 但有时太暴力，就算加两倍还有鼻涕XD : : 另外就是保存的问题，来回解冻或是配太久效力会下降，我第一次买新的用， : : 其效果之强令人惊艳，就算把量降到50%，都能在一分钟内把鼻涕给弄不见。 : : 另外一个小插曲：D4527有说要二价离子辅助，但有一次我白目拿到有EDTA-trypsin : : 去处理tissue，不用说，鼻涕一下就堵住筛网了，就算我DNase加到两倍量都没用。 : 很久之前的文章 : 但最近遇到一些初代细胞问题 : 想请教各位前辈.. : 1. sigma的DNase I: DN25(我用的) 和 D4527 应该都是需要二价离子辅助吧? : 那理论上就如同前文所说的Trypsin不能含有EDTA在里面 : 但我看的 Cuturling Hippocampal Cell (nature protocol) : 里面还是使用Trypsin/EDTA.... : 虽然中间经过2-3次HBSS清洗，是否还会影响呢? : 我的方式是Trypsin incubate 15分钟後抽掉 加入HBSS清洗2-3次再加入DNaseI : 但还是有些鼻涕... : 2. 和其他家老师学的时候 他们用9% O2养，有人用这环境养过吗? : 另外，想再问抗生素(Gibco:15240-062)会不会影响初代神经细胞生长 : 我用的是1%，因为我学的时候是AA-free : 感谢大家，也欢迎一起讨论难搞的初代神经... 我也有养过primary neuron 到业界一阵子了 但大部分都还记得 自认我养neuron养的还不差 而我从没用过DNaseI 在trypsinzation那一步时 轻轻地摇晃 绝对不能用pipeting 理论上就不会伤害细胞 genomic DNA也就不会跑出来 这是我的小小经验噜 -- 单身不代表寂寞，寂寞是走在一个不爱你的人身边的时候。 --

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