※ 引述《LIAR (玻璃做的大叔)》之铭言： : ※ 引述《latte366 ( )》之铭言： : : 大家一般用量是每多少mg的tissue加多少量的DNase I去作用? : : 同样的作用原理用在cell line的culture应该也OK吧? 只是用量可以减少? : : 还有大家有买过哪家的比较便宜的吗? 价格/per unit : : 爬过文没有看到相关的资讯 : 我用sigma D4527，应该有更便宜的。 : 我觉得经验比你算半天还有用，如果过程没有伤到太多，我有遇过不加都可以过40um， : 但有时太暴力，就算加两倍还有鼻涕XD : 另外就是保存的问题，来回解冻或是配太久效力会下降，我第一次买新的用， : 其效果之强令人惊艳，就算把量降到50%，都能在一分钟内把鼻涕给弄不见。 : 另外一个小插曲：D4527有说要二价离子辅助，但有一次我白目拿到有EDTA-trypsin : 去处理tissue，不用说，鼻涕一下就堵住筛网了，就算我DNase加到两倍量都没用。 很久之前的文章 但最近遇到一些初代细胞问题 想请教各位前辈.. 1. sigma的DNase I: DN25(我用的) 和 D4527 应该都是需要二价离子辅助吧? 那理论上就如同前文所说的Trypsin不能含有EDTA在里面 但我看的 Cuturling Hippocampal Cell (nature protocol) 里面还是使用Trypsin/EDTA.... 虽然中间经过2-3次HBSS清洗，是否还会影响呢? 我的方式是Trypsin incubate 15分钟後抽掉 加入HBSS清洗2-3次再加入DNaseI 但还是有些鼻涕... 2. 和其他家老师学的时候 他们用9% O2养，有人用这环境养过吗? 另外，想再问抗生素(Gibco:15240-062)会不会影响初代神经细胞生长 我用的是1%，因为我学的时候是AA-free 感谢大家，也欢迎一起讨论难搞的初代神经... --

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