作者windyflyer (重新寻找)
看板Biotech
标题[求救] 养菌用的agar
时间Tue Sep 24 18:18:59 2013
最近实验室陷入一种很诡异的状况....
我们家旧的做盘用的LB agar(厂商混好的那种)用完之後，就回归分开配的。
配方如下：
Tryptone 3g
NaCl 3g
Yeast extract 1.5g
agar 3g
水补到 300ml
本来我们做一瓶agar是到400ml 但不知道那台灭菌釜是又发生什麽事情，拿400ml去灭
(瓶子是500ml血清瓶)灭出来会只剩350ml....为了怕体积减少影响浓度所以减到300ml。
这样灭完之後体积不会减少，但怪事又发生，变成LB agar浊浊的好像根本没融化，摇一
摇还可以看到有细粉状漂浮物，就算拿去微波炉也无法消除。
第一次是用GeneMark家的agar，那时候我就发现GM的agar比我们之前用的还要白一点。後
来退货换成承洺的agar，结果还是一样。
有怀疑过是不是灭菌釜又挂点所以拿去隔壁系的灭菌釜灭，结果依然一样。
有试过先煮滚再灭结果还是无法使之均质透明。
然後这样做出来的盘，就算在hood里静置两天还是会大出水，接着就长超臭的杂菌。
那个大出水真得很夸张，我本来以为晾了两天还怕会乾掉，没想到却是大出水....完全无
法理解那麽多的水是从哪来的?!那个目测至少有50ml吧!!!乍看之下真得很像被人家倒水
进装盘的袋子。之前看到的还是透明的水，勉强解释成水蒸气吧...
今天看到的却是LB颜色的水!!可是盘子里还是有agat.....
就算想恶作剧也不会浪费到拿LB来灌吧.........
发生这些状况的盘，做完都不超过一个月。
LB的配方跟上面附的一样只是没有agar，但LB就非常正常，透明乾净无杂质。
实验室从来没遇过这种状况，学长们也束手无策，只好上来请教版众了Q Q这状况到底怎
麽发生?又该如何解决?
虽然有说服老师下次买厂商混好的LB agar，但眼前这罐总得用完吧...
(虽然我真的不想用，囧)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.174.196
1F：→ ROKEE:LB一罐没多少钱啦,浪费的petri dish都不只 09/24 19:16
2F：推 aeroufo:你们有试过在hood倒plate吗？会不会是你们环境问题? 09/24 19:36
3F：→ aeroufo:因为LB没长菌，所以应该是在倒plate的过程污染了，我猜 09/24 19:37
4F：→ windyflyer:我们一直是在hood倒盘的~ 09/24 19:46
5F：→ blence:一般的agar plate大概是1.5%,你们以前400变350ml至少浓度会 09/24 19:56
6F：→ blence:增加,现在300ml体积不变的话,agar浓度只有1%.... 09/24 19:57
7F：推 aceliang:1.5% +1，另外自配的话有调pH值嘛？ 09/24 20:31
8F：推 aceliang:另贵实验室autoclave压力有到20psi嘛？液体会滚有点怪 09/24 20:40
9F：推 bluesnow1122:PH值吧 会影响到凝固和菌的生长 09/24 23:02
10F：→ nike77114:直接试试看只有Agar看看会不会凝? 09/25 09:46
11F：→ windyflyer:因为一开始用1.5%粉末混浊状况会更严重 加上版上有查到 09/25 10:27
12F：→ windyflyer:1%才改的 以前也是用1.5%+1 09/25 10:27
13F：→ windyflyer:其实自配之前也用过也没问题 是换了agar之後开始的 09/25 10:27
14F：→ windyflyer:诡异的点在於连换两家都一样... 09/25 10:28
15F：→ windyflyer:直接拿去煮ok 可是不知道为啥搭了LB就不行 这两个分开 09/25 10:28
16F：→ windyflyer:都很好Orz 09/25 10:28
17F：→ windyflyer:我们之前一样的配方做法都ok 是换了GM的agar开始变这样 09/25 10:29
18F：→ windyflyer:压力没问题 因为拿去隔壁系的也是一样状况... 09/25 10:30
19F：→ windyflyer:调pH值唷..以前没这样做过._.可以讲解一下嘛XD 09/25 10:31
20F：→ HEK293:pH要7-7.4，因为LB里面没有buffer，所以pH变动会很剧烈 09/25 10:44
21F：→ HEK293:如果不进autoclave，一般建议是heat plate for an hour 09/25 10:45
22F：→ HEK293:试试先把LB溶好均匀清澈後，再加agar去灭。 09/25 10:46
23F：→ windyflyer:我有试过加热板先煮 不过大概只有30min滚了我就拿去灭 09/25 11:40
24F：→ windyflyer:了 先溶LB再加agar我会试试看! 09/25 11:40
25F：推 leoblack:400ml灭完会剩350ml,应该是Agar品质差~会突沸而喷出 09/25 12:51
26F：→ leoblack:既然LB broth没问题,那问题就出在Agar上~用Agar alone试 09/25 12:52
27F：→ leoblack:看光Agar溶於水微波加热~是否可全溶,又是否会突沸 09/25 12:52
28F：→ windyflyer:喔忘记说 实验室有人直接拿agar加水去煮是会溶的 不过 09/25 13:06
29F：→ windyflyer:那时候我人不在现场就是了.. 09/25 13:07
30F：推 joseph103331:我们实验室都是用粉+水 没溶就去灭 也没调pH 09/27 23:22
31F：→ joseph103331:都没甚麽问题 灭完会有一点浊 摇一摇就好了 09/27 23:23