作者pent (爱、失败、死亡)
看板Biotech
标题[求救] mouse heart ischemia-reperfusion injur
时间Fri Sep 20 21:35:43 2013
我做的是left anterior descending ligation
45min, reperfuse 1 day,用PE-10管子
绑在老鼠的心脏上的时候,
都觉得左心室下方到心间有变白,
可是同样都是WT,最後用TTC (tetrazolium)染色,结果却一直不稳定
有时pale region很大很明显,有时连一点点白色区域都没有,哀
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19820193
染色的方法大略是follow这一篇
我大致上是,牺牲老鼠,取出心脏,拿去-20度冰箱冰约20min,
同时用37度C水浴槽,warm 1% TTC (用深色的eppendorf)
然後把心脏从-20度C冰箱拿出,用刀片和模具切成约 1mm 一片
约6-8片,不一定
然後丢到刚刚warm的TTC solution, 等15min in 37度C水浴槽
15min後拿出来,
其实如果有pale region(cell death)就看的到白白的区域了
再丢进10% formalin, 固定
我和这篇paper的不同点,
paper的作者好像有用cling film包心脏丢到eppendorf
再拿去冰在-20度,我则是直接丢进eppendorf里就拿去冰了
哀,有人拿经验分享一下,该怎麽做吗?
连wildtype都做不稳,实在是做不下去了
还是因为动脉位置比较深的,所以我下针要更深一点???
实在搞不清楚问题在哪?
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