作者xiphos (火柴人@@)
看板Biotech
标题Re: [求救] Hif1 alpha看不到band
时间Tue Aug 27 02:58:05 2013
※ 引述《jas123654 (jack)》之铭言：
: 如标题
: 小弟目前要针对hif1 alphe做western
: 但是一直看不到band
不知道您是用哪种方式进行hypoxic treatment?
如果是用hypoxia chamber的话收lysate的时间就需要越短越好
: 小弟实验室在收lysate是先加PBS
: 收到沉淀物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4)
: 爬了下旧文 似乎有人觉得应该先加lysis buffer
: 我觉得是不是用PBS刮细胞的时候我的Hif1就被degrade光光了
: 不知道有没有高手能解惑的?
我的作法是先用足量的cold PBS很快的wash过一次,然後直接将lysis buffer加到culture plate中
将细胞打破後再把lysate收下来。
在我的认知中HIF1a就是一个对环境氧气非常敏感的蛋白所以所有动作当然是越快越好。
: P.S. CoCL2作为positivve control有押出来漂亮的band
: 所以可以排除跑胶 transfer 抗体 ECL的
如果可以附图的话会更好
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 124.8.142.142
1F：推 jas123654:我原PO 我是用CoCl2做positive control 08/27 08:01
2F：→ jas123654:induce hypoxia是用药物(不方便说) 但学长的DATA 08/27 08:02
3F：→ jas123654:normoxia其实还是有淡淡的BAND 所以我怀疑我的都被分解 08/27 08:02
4F：→ xiphos:normoxia的band大约是在哪个位置呢? 是在正确的位置上吗? 08/27 10:55
5F：→ jas123654:normoxia跟hypoxia band一样位置 在120KDa 08/27 11:12