各位...谢谢你们 我後来改成induction 25度 iptg 2000x 用6m guanidium hydroxychloride binding buffer 有溶出目标蛋白 但是无法和his column 结合 ※ 引述《coco85101 (我不是李纹)》之铭言： : 各位好 : 我已经卡在蛋白纯化很久了 : 希望大家可以救救我 : 我目前利用pET29-target protein(有His) transform到E.coli BL21(DE3)去进行表现 : IPTG induction 4hrs後 : 开始以 1X Binding buffer 回融菌 破菌 (sonicator 0.8/0.8 Amp37% 1hr) : *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate : 破菌後离心 分为soluble form 和 inclusion body : inclusion body再以 1X 6M urea binding buffer回融O/N : *500mM NaCl , 20mM sodium phosphate , 6M urea : 隔天离心後 : 发现我的目标蛋白没办法回融在含6M urea的binding buffer内 : 学长姐以前也从来没遇过这种问题 : 我的目标蛋白不是膜上的蛋白,没有signal peptide , 有两个ZinC finger : 也确定过已经大量表现了 : 且破菌时间蛮长的，应该菌都打破了阿 : 请各位救救我啊.... : 谢谢 --

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