作者yunchen1105 (小土尘)
看板Biotech
标题[求救] 流式细胞术的阴性对照问题
时间Wed Jul 31 14:57:01 2013
各位好，这是我第一次在这个板上发言，请多指教！
我的本科是药学系，但是也有细胞生物学的必修课程，加上有在实验室做实验，最
近遇到一个关於流式细胞仪的问题。目前做过一次分析血球中的活化T细胞，但是
原理不清楚。
是这样的，我们的实验总共用了三种试剂：
1.CD45/CD14
2.IgG1/IgG2a
3.CD3/HLA-DR
经由看了许多相关资料之後，知道1和3的作用是什麽，唯2非常不清楚。只知道和
阴性对照或是说同型对照有关，但网路上关於阴性对照的资讯非常少，不是都是复
制贴上的就是产品的广告，只有一篇和数据分析有关的文章说明得比较清楚。
我的问题：
1.文章上面写说流式细胞仪实验的对照有两种型式，一种是让完全没染过色的细胞
先跑一遍，另一种就是抗体的阴性对照。请问第一种也就是先跑没有染色的部分
是为了将其设定为阴性，之後再消除本身就会发出萤光的细胞的数据吗？
2.请问第二种也就是IgG的阴性对照的原理为何？看过最多的说法是IgG1会和细胞表
面上的非特异性受体结合，所以要用另一种isotype(IgG2a)来消除背景染色，请
问背景染色又是什麽东东？
3.为什麽要消除会和IgG1结合的细胞呢？如果细胞更纯更好的话，那麽细胞上那麽
多种受体，为什麽只做一种抗体的同型对照，有没有做很多种的？
谢谢看完～
我是从为什麽要加第二种试剂就不懂了，希望知道的大大可以描述得具体点，谢谢！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 115.80.19.183
1F：→ puec2:你用中文写我真的看不懂 07/31 17:15
2F：推 conective:1.是for 调整仪器设定用 2.是for 判断阴阳界线用 07/31 19:27
3F：→ conective:用IgG1或是IgG2a是跟实验中会用的的抗体来源有关 07/31 19:28
4F：→ conective:2称为 Isotype control 是作为抗体非特异性结合的判断 07/31 19:28
5F：→ conective:依据 特别是当你的细胞表现该Marker强度不强时 07/31 19:29
6F：→ conective:或是有无表现强弱之间差距不大 作为判断表现强度的准线 07/31 19:29
7F：→ conective:简单的说 活化的细胞的萤光强度 要大於Isotype control 07/31 19:30
8F：→ conective:代表这些多出来的强度 不是非特异性结合 而是真正有表现 07/31 19:31
9F：→ conective:2是你在後续分析时的判断阴阳标准 07/31 19:32
谢谢指教我会加强表达能力～
非常感谢C大，愿意详细回答我的问题，今天问了一位博士之後发现大概和您说得差不
多，原来第一管加的就是会去认CD marker的IgG，所以第二管才加不会去认CD marker
的IgG去做对照，我想第一管应该就是你所说的＂实验中会用的抗体来源＂吧！
我大概懂了，感恩～
※ 编辑: yunchen1105 来自: 101.13.168.30 (08/02 11:32)