作者puec2 ( .＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿.)
看板Biotech
标题Re: [求救] Protein以urea回溶 在接做ELISA问题
时间Fri Jul 19 02:34:20 2013
这要看抗体
Polyclonal antibody应该不受影响
Monoclonal antibody依其epitope特性分成两种：
Linear epitope
Conformational epitope
顾名思义 linear epitope只要序列对了就会bind
Conformational epitope则是认蛋白质三级结构中 不同位置的amino acid所组成的特定立体结构
如果不是太奇怪的蛋白质 可以染western blotting的monoclonal antibody应该都是认linear epitope.
※ 引述《e123917123 (黑羽神风)》之铭言：
: 版上众高手们好
: 小弟本身对蛋白质相关实验几乎没做过,目前正在做E.coli的inclusion body的蛋白质片
: 段,破菌之後,接着打算把此蛋白质跑SDS-PAGE及定量後,再接着做ELISA的实验
: 实验室的人说此蛋白是不可水溶所以需要使用Urea回溶
: 但是又听说Urea可能会影响到ELISA的抗体键结问题?但他们也不太肯定,因为目前的学生
: 没在做相关的ELISA实验部分~
: 所以想请问使用Urea溶过的蛋白质经定量後可直接拿来做ELISA实验吗?
: 还是需要再过透析?
: 另外此蛋白质有无建议保存的方式? 以後可能还需要用到继续测ELISA 怕会降解掉~
: 感谢各位高手~~~
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◆ From: 219.80.238.185
1F：→ e123917123:所以是linear epitope的话 有urea存在去做应该也OK罗? 07/19 23:17
2F：→ e123917123:因为加入抗原後 是会先washing三次再开始接一抗 不知道 07/19 23:17
3F：→ e123917123:到底会不会有差? 07/19 23:18
4F：→ puec2:UREA去乾净就好啦 07/20 08:15
5F：→ e123917123:这问题 小弟目前没经过透析 直接做ELISA应该是OK了 07/28 00:48
6F：→ e123917123:感谢各位解答^^ 07/28 00:48