作者poohwl (......)
看板Biotech
标题[求救] DNA gel bands 的 pattern 很奇怪
时间Wed Jul 3 16:58:44 2013
我抽了几个经不同处理的细胞的RNA，
再用RT kit转成 cDNA, 接着跑PCR
我的做法是各取等量的templet到PCR管中，再将混合好的Taq, primer. dNTP等量加到
每个PCR tubes里，接着votex、spin down，就放到PCR machine中进行反应。
跑胶之後,却出现奇怪的情形
1.出现多条band
2.sample的band有两种截然不同的pattern （1, 6, 9 lane)
附上照片
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=wch10211021&b=2&f=1408039934&p=0
看起来似乎问题不只一个，完全没有头绪该从哪里开始troubleshotting
希望版上的前辈可以帮忙解惑！
谢谢 ！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.113
1F：→ ai760721:P个nested看看? 07/03 17:21
2F：→ ai760721:预期的band是多大呢? 07/03 17:23
3F：推 ithinksoiam:原po转多少的RNA阿 07/03 19:16
4F：→ a90648:有一说是不要vortex，怕enzyme坏掉 07/03 21:20
5F：→ lougii:有没有可能是电极线的问题啊.?有试了control吗? 07/03 22:29
6F：→ BGG:转cDNA 有用到 random primer 吗? 07/03 23:23
7F：→ huuban:用了哪些primer呢？专一性够不够？ 07/04 11:50
8F：推 biingru:请问您的胶是不是没有让它硬够？ 07/04 11:56
9F：推 KittyGod:可爱的波浪造型 所以问题是电泳出现波浪吗? 07/04 22:00
10F：→ JanChang:其实vortex个极短时间不太会破坏enzyme，不要高速vortex 07/05 16:15
11F：→ JanChang:10秒这种就好，通常我是会vortex 1秒左右就停。 07/05 16:16
12F：→ JanChang:不过很可能是primers专一性不够，有可能是有alternative 07/05 16:17
13F：→ JanChang:splicing吗？ 07/05 16:17
14F：推 ljii:band歪是gel作的不好, 没有摇匀或微波不够久或没有solidify够 07/06 00:16
15F：→ ljii:至於多条band, 可能是anneal temp太低, primer专一性不够, 07/06 00:17
16F：→ ljii:不然就是根本实验无误, 是同个mRNA的alternavtive splicing 07/06 00:18
17F：→ ljii:不过你没有提到你预期的band多大,还是根本就是预期有不同大小 07/06 00:19
18F：→ puec2:vortex会破坏enzyme? 那会不会把抗体的手震断？XD 07/06 04:27