各位学长姊大家好 小弟最近正在试着用萤光显微镜去观察吞噬细胞 对一个带有萤光bead是否可产生吞噬? 但是一直不太顺 我的protocol大致如下 1.将细胞以LPS进行刺激 1hr 2.用PBS Wash 1次 3.将细胞加入FITC-bead(Cell:bead=10:1)进行吞噬反应一小时 4.利用PBS Wash 2次後进行cytospin後直接上萤光显微镜观察 这个protocol的几个问题点 1.我进行吞噬的细胞主要有两种 一种是悬浮性的细胞 另一种是半贴附的细胞 试问半贴附的细胞在做wash後需以trypsin打下来吗? 还是单纯用medium冲刷下来就好? 2.做完cytospin後细胞被离心到玻片上 是否还是须加盖一层固定液再上去观察 怕细胞乾掉 但又怕加下去就把细胞冲散 3.在可见光观察细胞以及绿萤光观察bead情形两张图片merge後 bead和细胞重叠是否不能代表细胞一定对bead进行吞噬? (也可能只是表现在膜上?) 所以是否需再利用一个cytosolic的萤光marker或是带萤光的 cytoskeleton去染细胞 再观察cytosolic marker的图和bead萤光是否能重叠? 麻烦大家指导一下小弟 看protocol可再如何修改会较为完善 谢谢大家！ --

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