※ 引述《poulnew (poulnew)》之铭言： : 最近从中研院购入shRNA，且含2组 negative control(shGFP,shRFP) : 目前一切正常，惟有这两组negative control(shGFP,shRFP)无论麽抽 : 所得到的plasmid产量都大概是实验组的1/5而已，所有培养& mini prep.的条件都 : 与实验组一样 : [incubate 16-18h+shakeing 200rpm / TB(Amp plus100ug/mL / Qualegen kit] : 可以确定的是，我已经将抽mini菌液的量提高到4mL，也确定离下来的菌非常多。 : 但是抽出来的量还是低於实验组，最近即将要抽大量，想在抽大量前解决此事。 : 刚爬文後有些头绪，但还是麻烦各位先进再给个建议。 : 1.是否为菌种老化，但菌种老化不是跟生长速度有关?会造成质体产量过少吗? : 2.抽质体时P1,P2,P3体积拉大，让lyse效果增加?? 纯粹个人想法 : 最後想问，是否有实验室刚好有negative control shRNA菌种，可否分一些给我培养。 : ps我人在台北石牌这 这个很好解决啦 答案就是 1. 你的菌种在TB里面可能长太快 听到离下来的菌"非常多"就知道不妙了 老化的菌里面的plasmid量的确会减少 我以前还遇过完全抽不出东西的 用掉了两盒MIDIPREP KIT 怎麽抽就是没东西 菌量也"非常多" 解决方法就是缩短培养时间 缩短到12小时 我现在用的条件甚至 10小时就可以抽miniprep. 只不过要用特殊kit :) 这真的是一个很打击信心的实验问题 因为你一切都照procotol做 严格要求自己要 养16-18小时 但是抽不出来就是抽不出来 你实验组的plasmid可以拿到的原因 可能是你的菌带有实验组plasmid 生长速度会比较慢 所以16-18小时以後还有足够的plasmid 但其实如果你缩短培养时间说不定可以拿到更多 的plasmid. --

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