作者qqmango (听，是谁在唱歌)
看板Biotech
标题[求救] western 压片杂点
时间Sat May 11 15:22:42 2013
最近在压Plasma membrane上的蛋白质，利用不同NP-40浓度的分离protocol。
但跑完照UVP後，发现在目标蛋白质大小的部份(48-63kd)，会有莫名其妙的杂点。
如图:
https://www.dropbox.com/s/me5f16hp1r2mqif/sdf.jpg
而internal control的部份(9x kd 以上)背景则是相当乾净。
当初怀疑可能是一抗或是blocking suloution(5% milk powder)的关系，
但昨天用了一般WB的萃取total protein去压目标蛋白质，却没有这样的问题。
怀疑会是在分离膜蛋白质时用了NP-40的关系(0.1% -> Free -> 1%)，
实验室的NP-40放在离心管应该有个一两年以上了，不确定会不会是这个因素，
但在Internal control的部份90kd以上，又不会有这些杂讯。
不知道有没有哪位前辈可以救命，感谢!
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所有物理定律都不是百分之百正确，
当然，更不是真理。
物理定律只是反映出，人类企图定量的了解物质宇宙过程中，
所给出的数学模型。 就像牛顿运动定律是不正确，
牛顿万有引力定律也不太正确， <
联立 >
但这并无损它们在人类探索自然定律过程中的地位，它们具有永恒的价值。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.191
※ 编辑: qqmango 来自: 140.112.98.191 (05/11 15:23)
※ 编辑: qqmango 来自: 140.112.98.191 (05/11 15:23)
1F：→ blence:很像一抗的问题,放太久,有沉淀,未spin等,尤其是放冷藏的 05/11 16:11
2F：→ lask:有些一抗你泡在牛奶里会这样，可以改成泡在 1% BSA中试试 05/11 18:08
3F：→ lask:同一片SAMPLE其他蛋白都没问题，我不会先去怀疑蛋白有问题 05/11 18:09
4F：→ qqmango:一抗是在5% BSA中压o/n，因为一般抽的话压起来都ok，但用 05/11 18:53
5F：→ qqmango:膜蛋白分离protocol才会出现，所以不知道是什麽状况 05/11 18:53
6F：→ jsi:牛奶没有完全溶解也会造成这种现象 05/12 23:19
7F：→ qqmango:因为同一片都是用同样的blocking sol.，有可能会因为抗体 05/13 00:08
8F：→ qqmango:的关系而有差异吗? 05/13 00:08
9F：→ qqmango:但是若是压Whole cell lysate又很正常，可能会是什麽因素 05/13 00:09
10F：→ qqmango:呢? 05/13 00:09