作者allthebest (allthebest)
看板Biotech
标题[求救] glycerol stock 若是被杂菌污染
时间Sat May 4 23:46:37 2013
事由:plasmid transfection细胞後一直污染
做法:stock 种midi 然後抽plasmid
plasmid+jetpei+transfers buffer 做transfection(24hr观察就有长菌了)
已重抽两遍....做transform都有污染...
已做的truble shooting:
1.2.3.buffer,plasmid,jetpei only
4.plasmid+buffer+jetpei
结果1，2，3乾净4又长菌了(我要崩溃了)到底为什麽啦？(爆气
尤其是我一次抽很多不同midi 只有这一只plasmid怪怪的 总之我决定重新transform
不过先假设是我眼残(没在plasmid only看到有菌)真的是plasmid有污染好了 我很好奇如果在stock有杂菌在抽完plasmid後也会有菌菌污染吗？(我很确定elution buffer是乾净的)但就算stock有杂菌我最後不是也只会得到杂菌的plasmid吗？？？
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◆ From: 101.9.217.244
1F：→ xxtomnyxx:你有试过把plasmid在hood中做酒精沉淀重新回溶吗？ 05/05 01:04
2F：→ allthebest:没有耶 不过我用的midi prep kit的wash buffer倒是有 05/05 01:50
3F：→ allthebest:所以x大的意思是 抽完并elute出来的plasmid要再做一次 05/05 01:52
4F：→ xxtomnyxx:如果你已经抽出plasmid，却怀疑他可能有污染，可以再做 05/05 13:26
5F：→ xxtomnyxx:一次酒精沉淀把污染物去掉。 05/05 13:27
6F：→ xxtomnyxx:基本上冻菌就算有污染，也只会让你种LB时就长杂菌或发霉 05/05 13:28
7F：→ xxtomnyxx:，或是抽出莫名其妙的plasmid，不会把污染物带到elute中 05/05 13:29
8F：→ xxtomnyxx:，因为抽plasmid的buffer 2 基本上会杀光细菌霉菌。 05/05 13:29
9F：→ xxtomnyxx:你有试过排除其他可能污染源吗？例如把medium拿去incub- 05/05 13:30
10F：→ xxtomnyxx:ator 放个1、2天？ 05/05 13:30
11F：→ roy047:同意楼上~不然每次transfection都会有E.coli污染(也是菌啊) 05/05 20:54
12F：→ roy047:测: plasmid only, jetPEI only, serum free medium only 05/05 20:56
13F：→ roy047:serum free medium是transfection时使用的那个 05/05 20:56
14F：→ roy047:orz 有点搞错 jetPEI是用NaCl, 不是用medium 就测NaCl看看 05/05 21:00
15F：→ roy047:然後可以测久一点 有时因时间太短不明显所以会误判没污染 05/05 21:03
16F：推 kevin1983:buffer2含SDS不就破菌了吗？stock有污染也不会到plasmid 05/05 22:22
17F：→ allthebest:我也知道问题有点蠢 因为发文後半段也有写顶多只抽出 05/06 14:53
18F：→ allthebest:杂菌的plasmid 05/06 14:54
19F：→ allthebest:我也有空培 back only,plasmid only 05/06 14:55
20F：推 HEK293:杂菌的plasmid是三小？ 05/06 14:55
21F：→ allthebest:nacl only (打错 05/06 14:55
22F：→ allthebest:请连着看 ="= 05/06 14:57
23F：推 silentence:怕抽到杂菌的拿去enzyme digestion跑胶看看阿 05/10 16:13