作者poulnew (poulnew)
看板Biotech
标题[求救] Ecoli内质体含量过少
时间Fri Apr 26 02:00:47 2013
最近从中研院购入shRNA，且含2组 negative control(shGFP,shRFP)
目前一切正常，惟有这两组negative control(shGFP,shRFP)无论麽抽
所得到的plasmid产量都大概是实验组的1/5而已，所有培养& mini prep.的条件都
与实验组一样
[incubate 16-18h+shakeing 200rpm / TB(Amp plus100ug/mL / Qualegen kit]
可以确定的是，我已经将抽mini菌液的量提高到4mL，也确定离下来的菌非常多。
但是抽出来的量还是低於实验组，最近即将要抽大量，想在抽大量前解决此事。
刚爬文後有些头绪，但还是麻烦各位先进再给个建议。
1.是否为菌种老化，但菌种老化不是跟生长速度有关?会造成质体产量过少吗?
2.抽质体时P1,P2,P3体积拉大，让lyse效果增加?? 纯粹个人想法
最後想问，是否有实验室刚好有negative control shRNA菌种，可否分一些给我培养。
ps我人在台北石牌这
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 180.176.8.224
1F：→ blence:看起来只是取stock菌液放大,而不是重新挑single吧 04/26 02:42
2F：推 HEK293:1.其实会 2. 4ml真的太多，要马放大buffer要马减少菌液 04/26 08:43
3F：→ HEK293:或是另外streakout，如一楼b大所言重挑吧 04/26 08:44
4F：→ HEK293:又...其实这类型菌株当初都有签MTA，原则上不能赠予 04/26 08:45
5F：推 samuelptt:不是可以直接买vector? 04/29 16:24