作者brume1026 (苍之涛)
看板Biotech
标题[求救] 请教comet assay相关问题
时间Wed Apr 17 11:39:30 2013
各位好:
这是我第一次做 comet assay
我们家有买 TREVIGEN 的 kit
所以分别有做了 Alkline/Neutrl 二种
有按照他们家的 protocol 做
但我们家没有专门跑 comet assay 的电泳槽
只能用一般跑gel的电泳槽跑
请问:
(1) 跑gel的条件是使用1x TBE,
18 V/cm,跑30分钟
[利用外接电源供应器(MP-250V),1 V/cm,电泳槽 - → + 为18cm]
但是电流就没像说明书上达到~220mA
这样跑出来的是没问题的吗? 还是需要借专门跑comet assay的电泳槽?
(2) 请问利用这套kit做需要用盖玻片压吗?(一开始将胶滴在玻片上的时候)
而且最後在37度烘箱烘乾之後,需要再做额外的处理吗?
需要再加mounting medium在封起来吗?
因为利用萤光显微镜拍照的时候很常对不到焦
请问有什麽解决的方法吗?
请有做过的大大指导一下
感恩^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.66.102
1F：→ blence:一般电泳槽即可,可是我看到的常见的是14cm,你的还有点大 04/17 13:25
2F：→ blence:这个kit不需盖玻片,买来的已经coating好了,还有,别用37度 04/17 13:27
3F：→ blence:比较好,泡EtOH後直接放有机hood烘一下很快就乾 04/17 13:28
4F：→ blence:也不用封片,对焦不到是因为gel还是有其厚度,其中包覆cell 04/17 13:31
5F：→ blence:所以无法在同一层,一开始放的agarose量减少比较能解决问题 04/17 13:33
6F：→ brume1026:谢谢楼上大大的帮忙^^ 最近来试一下减少agarose的条件 04/18 10:12