作者imafsb (匿名)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE 的 running buffer
时间Thu Mar 28 00:32:35 2013
小弟是化工系的，最近想用SDS PAGE分离蛋白质然後定量
由於sample中的蛋白质总量很少(0.1 ug/ml)，所以使用SYPRO RUBY染色
放隔夜染色之後用10%酒精/7%醋酸洗30分钟，就送去scaner读了
不过做出来的结果，完全看不到蛋白质，marker条纹也很淡
据TechComm助理说应该不是染剂的问题，是胶有问题
但我确定我的seperating和stacking gel配方都对，
loading buffer用100 mM DTT帮助变性
唯一发现有错是running buffer没有加0.1% SDS
想请问这样会有影响吗？
另一个我想到的可能原因是，我染色前没用fixation，这会是主要原因吗？
感谢各位的帮忙!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.61.143
1F：→ trumpet:SDS一定要加 03/28 08:09
2F：推 transmore:没有SDS 就不叫SDS-PAGE了 03/28 13:10
3F：推 martyrtitan:fix也要做 03/28 16:26
4F：推 tinaminikimo:加油 至少你有想出原因 03/29 00:23
5F：推 joseph103331:把东西确实操作一遍後再来做问题搜寻比较踏实 03/29 00:57
6F：→ joseph103331:在"操作错误"上面打转其实不好回答正确的问题 03/29 00:58
7F：推 conective:SDS没有加..... 03/29 11:06