作者conective (晓枫残眠)
看板Biotech
标题Re: [求救] 混合癌细胞打入老鼠实验
时间Wed Mar 27 00:19:16 2013
※ 引述《belly0529 (颗颗)》之铭言:
: 各位好,最近需要做老鼠的实验
: 因为是第一次做这样实验,所以有些问题想请教
: 1.许多资料写matrigel(浓度10mg/ml)混medium比例为1:1
: 意思是我数完细胞(如果取1*10^7这样的细胞数会不会太少?)
: 假设细胞液需要取100ul那matrigel同样取100ul
: 之後将混和的200ul皮下注射到老鼠体内这样吗?
: 2.另外想请教的是我有爬过文
: 有位版友有些说明我不是很懂
: 他说在数完细胞以後取需要的量然後离心再将细胞混和matrigel
: 想请问为什麽还要再次离心?那离心之後需要吸掉上清液吗?
: 可是如果离心了,这样我就不懂第一点matrigel混medium比例为1:1的意思了
: 麻烦有经验的版友可以告知或是提供建议,真的非常感谢
不是很确定你的问题
试着回答看看,有错烦请其他版友指正
简单说你要确认的点有两个
1.你的实验要打多少细胞到老鼠身上
2.打进去体积要多少
确认这两点之後,把要打的细胞处理好数细胞
假设你要打50μl体积,10^6个细胞进去,但你数出来的细胞浓度是10^7/ml
可是这样如果要取得10^6的细胞,光原始体积就100μl超过50μl
这时候可以用2里面的方式,先吸100μl的细胞让总细胞数达到10^6
离心去掉上清液後,用50μl的matrigel与medium 1:1混合液回溶
让细胞最後回溶在1比1的matrigel, medium里即可
换言之,2是因为细胞浓度低於打进去的目标浓度,所以用离心浓缩的方式调整
假设你的细胞浓度高於你设定要打的浓度,也可以用稀释的
一般而言,动物实验一次都会做颇多只,尽量每只的条件也要一致
所以用离心的方式再回溶到混合液是比较乾脆而且一致的方法
因为你每批处理的细胞由於生长状况不同,处理完细胞浓度可能不同
如果用稀释达到需求细胞浓度,最终体积可能会不一样
倒不如用离心的调整就好
不晓得这样有没有回答到你的问题
另外,要打细胞的话请注意针的粗细,太细细胞会破掉
请去查询应该用几号针注射
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