作者Tendin1015 (Tendin)
看板Biotech
标题[求救] Q-PCR 新手求助 (夹不出东西)
时间Tue Mar 26 16:13:17 2013
各位前辈大家好，
小弟第一次接触 Q-PCR 的实验，但遇到了一些问题始终无法突破。
抽 RNA 的部分我是用一般的 Trizol，260/280 也约在 1.9~2.0
跑电泳看 18S/28S 的情况也还 ok。
转 cDNA，然後跑 Q-PCR。
第一次试跑我选用 Beta-actin。
我先配 mixture (H2O、2x Taqman Premix、Primer F+R、Probe)，
先加到毛细管後再加入 cDNA。
Q-PCR 的 program 也是按实验室方法去设定，可是我还是没有跑出东西。
後来向前辈借用他们确定能跑出来的 cDNA 来试，结果还是没有东西。
我觉得应该就是 Q-PCR 这部分出了什麽问题，
也有请实验室前辈在旁指导，也没有什麽说操作上有什麽问题。
想请教各位前辈，是不是有什麽细节我忽略了，
不然我照着 Protocol 做还真的是跑不出来，困扰已久。
(Reagent、Primer、Probe等也都是跟前辈们用的一样)
麻烦各位前辈看看有什麽经验或细节，给我一些建议。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 120.126.88.222
1F：→ mesenchymal:看你描述不是机器就是reagent出问题, Primer? 03/26 19:04
2F：→ WinnieDad:有用qPCR跑完的samples再去跑agarose gel看看是否有PCR 03/26 19:15
3F：→ WinnieDad:产物确认一下吗？ 03/26 19:16
4F：→ Tendin1015:谢谢大家，确实是 reagent 的问题。跑 gel 有产物。 03/28 23:22