作者supray (zeroro +_+)
看板Biotech
标题Re: [求救] PCR无法放大片段
时间Sat Mar 23 15:25:51 2013
※ 引述《adamada (soso)》之铭言：
: 手上有一对primer
: 如果是用Plasmid当template的话
: 这对primer是可以使用
: 但如果把plasmid放大的产物经由Gel-extract後
: 拿来再次放大
: 却无法有产物!!!而只有Smear.....
: 请问有什麽方法可以解决吗??
如题以你纯化过的的PCR产物当template 50ng
假设是1000bp 分子量以660000计算,PCR总反应体积 20ul
那你的template的浓度大概接近 4 nM
如果你的primer下 500 nM
理想情况下,不出 7 个 PCR cycle primer 就用尽了
7个cycle才放大几百倍而已,在准备PCR反应时template搞不好就稀释10倍了=.=
还有因为template过多,很多都是只p上一端的半成品,两条primer要夹出来的机率也少
所以你的PCR结果是smear还满正常的
plamid或PCR产物当template 10~100 pg就够了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.32.23.148
1F：→ supray:越大的template 量可下越大 03/23 15:32
2F：→ supray:如果plasmid > 10kb 下到ng等级应该OK 03/23 15:33