作者fall199721 (Wendy)
看板Biotech
标题[求救] 关於wound healing assay的几个问题
时间Wed Mar 20 11:32:11 2013
(有先爬文再来问问题, 如果还是跟板上过去的文章有重复我会自删^^")
最近开始要做wound healing assay, 可是在实验设计上遇到几个问题
想请教一下大家
我先把我的实验条件跟使用细胞讲一下
我的细胞是293 overexpress A gene(也就是我要看的gene) 还有vector
这些都是 stable clone
以下这是我的protocol
我是用6-well plate 来做实验,
前一天先seeding 1.6*10^6/ well, incubate 16-18hr後, 先用2ml 1x PBS wash 一次,
之後加入low-serum mediun(FBS conc: 0.5%) starve 24 hr, 用200ul tip 划线後,
wash之後再加入我的condition medium
然後我有几个问题想请教大家
1. 昨天种了1.6*10^6/ well之後,
今天早上来看,发现细胞的贴附情况并不是很好
(而且轻轻摇晃plate ,细胞会有飘浮起来的现象),
虽然说293本身的贴附能力并没有很好,
但我之前遇到这种情况都是293已经长满,才会有这种漂浮的现象,
想请问大家如果有没有遇过这种情况?
然後293 种在6 –well 里面通常都是种多少的细胞数比较好呢?
2. 假设我把细胞种少一点(但一开始vector 跟a gene stable种的细胞数是一样的), 等
它们长满再开始做实验,请问这样会影响到实验结果跟误差吗?
3. 如果我只是要看normal状态下,这些stable clone的爬行能力(也就是说我的
condition medium里没有加其他的东西)
请问FBS 浓度用多少才好?
以上这是我的疑惑 , 先在这边谢谢大家了!!!><
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
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◆ From: 140.116.93.172
1F：推 jamesonly:1. 我细胞数跟你差不多，以前会因为pbs洗太大力而状况 03/21 11:48
2F：推 jamesonly:2. 基本上不影响吧! 只要两组细胞数固定就好了 03/21 11:50
3F：推 jamesonly:一般情况下我在staving後会加10%的，但也有学姐是用5% 03/21 11:53
4F：→ jamesonly:提外话：原来手机可以连推！ 03/21 11:54
5F：→ fall199721:感谢!!!!! 不好意思这麽晚才回文^^" 04/02 16:05