※ 引述《josephkokomo (...)》之铭言： : ※ 引述《mysterywind (mysterywind)》之铭言： : : 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 : : 以方便板友帮您追踪问题 : : ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- : : 请问有人做过Baculovirus的蛋白表现吗? : : 我一直无法表现我的目标蛋白 : : 确定有转染成功 也有抽病毒DNA : : 但是 跑SDS WB就是没东西? : 你是指用Baculovirus system表达你要的蛋白吗 : 另外假设是cytosolic protein : 1. Cre那步骤之後 你有确定你的DNA被insert成功吗 : 2. virus 有测过 titer吗 或是你确定加入virus有成功感染你的cell (可以从生长曲线推测) : 3. virus infection 之後 等多久作SDS-PAGE : Invitrogen(life)的使用手册有完善的教学 1. 我有跑过PCR确定基因有进去 2. 我们没有测titer 目前是打算先求有表现 再调整 也怕titer太低 测不到 生长曲线怎麽做? 我是依照 CPE的情况 来判别是否成功感染 3. 基本上是3天左右收细胞 跑SDS WB 因为同样的方法 其他人的基因有表现出来 我也有做过别人的基因 有表现 就是不知道 为何就是自己的表现不出 ?? 想说还有哪些调整比较好!! --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.19.144