大家好: 想请教大家关於Southern DIG的实验问题... 因为本实验室尚无系统，我做了好几次都只有marker跟positive control有杂合讯号.. 我的材料是比较少人做的中草药植物.." 用CTAB法抽取DNA 以下有几个问题想请教大家..> < 1.植物gDNA的浓度 (这应该是最主要的问题..?) 我之前都是用O.D值测DNA的浓度，同时也会跑胶check 虽然我知道O.D.值没那麽准...但还是用它估算约15 ug 的DNA 去切酵素 想问大家大概都拿多少的DNA去做southern dig 2.探针 想问大家做探针的方法，毕竟植物genome复杂，都会担心探针效率好不好 a. 说明书是写把insert接到T-vector里面，再用酵素切，跑胶回收片段 拿去做探针。但切胶回收感觉都会流失很多...这方法我还没试过 b. PCR产物直接以Kit纯化，之前都是用这方法做探针 探针效率以说明书的方法测试，也是ok的 c. PCR产物跑胶之後，切胶回收片段，这方法我也没试过.. 这三种哪种方法比较好...? 3.目前实验室有两组Kit DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I (Kit for color detection with NBT/BCIP) DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II (Kit for chemiluminescent detection with CSPD, ready-to use) 我知道是呈色方法不同，据厂商说是CSPD比较灵敏.. 但我用CSPD也没有成功过.. 想问这两组kit哪一组比较好，或是有做成功的人可分享一下经验吗? 我已经失败到心灰意冷了> < 谢谢大家帮忙 及 耐心看完我的问题 --

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