作者kattyhouse (kat)
看板Biotech
标题[求救] Caspase 3 Assay kit测活性
时间Sat Feb 2 01:38:13 2013
想请教前辈们
因为利用H2O2做为杀死细胞的药品
想要利用BD caspase 3 assay kit来测定caspase 3的activity
老板是叫我测12,24hr
但我测时，发现有H2O2的组别跟control组并没有太大差异...
先前学长姊及BD的protocol并没有需要订量protein
(BD protocol: lysis cell(2-10x10^6/ml 的lysis buffer)-->
incubate 在冰上30min
取50-100ul的lysis与substrate和HEPEs buffer mix
incubate in 37度1 hr)
但因为我24hr做不出来
2,6小时发现有差异...但并非显着 (在6hr intensity差大概50)
所以...
是哪里有需要改进的地方吗???
我有问过BD的人说需不需要测并protein 浓度
BD说不需要...
所以...其实还是需要测的?
还是...我收细胞的时间太长了?
(H2O2treat大概在3hr有拍到PARP cleavage但不明显，但在12hr有明显的PARP cleavage)
这真的很困扰我啊!!!!!!!
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.160
※ 编辑: kattyhouse 来自: 210.60.122.160 (02/02 01:45)
1F：→ ChesterYeah:如果觉得细胞量种的准，可能protein产量不会差多少 02/11 21:24
2F：→ ChesterYeah:如果误差很大，我想抽出的protein会有差异 02/11 21:25
3F：→ ChesterYeah:这可能是BD觉得不用定量蛋白质的原因 02/11 21:25
4F：→ ChesterYeah:不然就跟跑western一样 都要BCA~ 02/11 21:26