※ 引述《vconquer (vconquer)》之铭言： 前面恕删~ : 最近抽Plasmid 又遇到一个难解的问题 首先先从plate上点单一菌落以LB+抗生素 : 培养某菌 第一次抽出来跑电泳 完全没东西 於是我和别人借了他的plate 重新点菌 : 发现该菌 完全没有长(plate是LA+am) 此部分建议确认一下这个 plasmid 确实是用 amp 筛选(应该是啦) 毕竟从两个不同来源plate上挑的都没长, 抗生素的种类可能有问题, 确认没错的话, 也有可能是: 1.抗生素太浓 (更改浓度) 2.有该 plasmid 的菌固定长很慢 (如果 plasmid size 不大, 这个机率很小) 3.盘子上的菌老化了 (如果手头上还有 plasmid (一点点即可), 可 retransform 回新的 competent cells, 再重挑出单一 colony 确认, 对的话再冻菌保存) : 我跑了colony PCR 想要确认这株菌里面还有没有 : 我要的片段 但跑出来 又是正确的= = 虽然我挑单一菌落的数量不多 今天想说再来 : 重抽Plasmid试试看 发现有抽出东西 但是 有两条band 还有smear现象..... : 我不知怎麽办阿ˊˋ plasmid 抽出来直接跑电泳确实会不止一条 band 没错 (亦可能 smear), 因为有supercoiled, linear, circular forms 那些的... 要确认的话建议用 RE 切一刀, 再跑电泳看是否为单一 size 才准 希望有帮到忙~ --

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