想跟大大求救... 我的实验主要是把血液中的PBMC分离出来之後在加上药物去做培养 经过7天之後收取soup 用ELISA测cytokine的浓度(IFN-g) 之前刚应徵进来的时候 那时PI把我放到某研究所去学实验 当时做出来的测的Data 都还蛮正常的(至少所测得之浓度平均都还有20以上) 之後PI希望把这项实验拿回某医院操作(主要是希望用fresh的血液直接操作) 因此 我一开始有从某研究所拿一些东西 搬回到某医院(配好的mediun 所需要测试的药物 ...之类的) 一开始在某医院操作时 所跑出来的data与在某研究所时做的差不多 只是到上个月 发现说 按照一样的实验步骤所测出来的值 居然越来越低 除了postive control的浓度可以到破百之外之外 其余所测试的只剩0.x或是1.x...这样的浓度 不知道问题到底出在哪里 在某医院操作时除了机器设备之外 一开始都是使用我从某研究所实验室拿过来的东西 到後来因为medium没了 也刚好是上个月我就在某医院第一次配置medium 和 之後把所 测试之药物重新配置 换一批新的(重配置的药物浓度也是按照当初某研究所的那间实 验室所给予的浓度) 这问题困扰我很久 因此想请问各位大大 有可能是cell culture时发生的问题嘛 我所使用的medium是RPMI1640 外加AB型的人的serum 和PSA 最近的DATA 所测的的值是0.x or 1.x 应该可以代表 在培养细胞时 细胞养到後面是死 光了 所以才没分泌吧 只是 一开始我在某研究所做的时候 也是按照一样的protocol这样操作 不懂 搬回某医 院操作时 最近的data就变成这样 我是怀疑 是不是我在配置medium时 有问题 但收soup时 medium没有混浊或是有漂流物 因此 我先排除有备污染的可能... 想请各位大大给些意见....@@ p.s...如果有实验条件没说清楚的 我可以在补充 感谢大家 --

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