※ 引述《kattyhouse (kat)》之铭言： : 因为实验室刚开始做cortical neuron的primary culture... : 所以想跟版上前辈们请教 : 是取出生24hr内SD Rat 的cortex 使成为 single cell : 再利用DMEM/F12+10% FBS 培养24hr後 : 才换成DMEM/F12+B27+Ara-C (10uM) ^^^^^ 你加了Ara-c喔 我没有做过新生老鼠 所以不知道culture以後的Glia含量 不过E17的胚胎在加了Ara-c 以後因为Glia(释放出的养分)不足 容易导致细胞死光光喔~ 一般的决办法是使用Glia condition medium 或是偷鸡的把养了Glia的玻片放进同一个well里面 我记得某一篇paper在medium里面不知道加了什麽 是全没有使用Glia condition medium 不过E17,18的neuron的确是又纯又容易生长没错阿~(菸) 看了一下前面的推文 的确在把细胞打散的时候细胞很容易受伤 如果想要culture纯度较高的neuron 我们也是 DMEM + 10% FBS 一天以後换成 NB + B27 + Glx NB听说除了可以促进神经细胞的生长以外 也比较不利胶细胞的生长 希望你实验一切顺利啦! : 并且会另外添加钾离子(K+)使Medium中的钾是20-30mM : culture在PDL(poly-D-lysine) coating 的coverslip上 (cell density是2X10^5) : 但是细胞会在1周内死亡 : (4-5天会有morphology的change会有细胞空洞并且有凋亡的现象) : 但一般都可以培养2week以上... : 请问有前辈知道是哪里有做错的地方吗?? : 谢谢 --

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