作者sanichi ( 扶桑花小班班长)
看板Biotech
标题[求救] RAW264细胞发炎反应相关实验
时间Thu Nov 8 20:52:36 2012
我们研究室常需要用RAW细胞做发炎反应的相关实验~
基本上都是用LPS(5ug/ml)或3T3L1脂肪细胞的conditioned medium来诱发发炎反应,
但最近两年RAW细胞的状况一直不太稳定~
control组(PBS,serum free media)常已经处於发炎状态，
NO或TNF-a的分泌量都几乎要跟LPS组的一样多~
买过新的RAW细胞,一开始情况有改善...
但passage2~3次之後,control组又开始出现发炎反应...
而且增殖的非常快,大概1~2天就要passage~
这两年发炎相关的实验都无法正常进行...
medium是用买的所以不太可能是配置上的问题
我有想过会不会是FBS的问题...
因为中间有换过厂商
但有时候实验又可以正常进行...
请问有人有类似的经验吗???
RAW细胞的培养有什麽和其他细胞不一样特别需要注意的地方吗???
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.146.150.104
1F：→ genep:以前养macrophage cell line都要买low-endotoxin FBS, 11/08 22:22
2F：→ genep:Hyclone跟Gibco都有 可以问问其他实验室或是sales适合的 11/08 22:24
3F：→ genep:不过不能确定是不是跟你的问题有关 11/08 22:25
4F：→ jasonstudio:个人觉得FBS差很多耶 还有你用的PBS也有差 11/12 22:36
5F：推 jasonstudio:还有就是你有爆盘 FBS真的要挑LOW-ENDOTOXIN的 11/12 22:39
6F：→ jasonstudio:如果你是用冲OR刮的手法让碎片变多个人觉得也会有差 11/12 22:39
7F：→ jasonstudio:FBS可以的话看用的量把同个批号买下来吧 11/12 22:40
8F：→ jasonstudio:另外控制两天OR三天passage吧 一天我也觉得很容易发炎 11/12 22:41
9F：推 c1314205:细胞不能太满，一满就容易受到刺激，推楼上，起码要2天才 11/13 15:18
10F：→ c1314205:能pa一次，macrophage很容易受到刺激活化，pa的过程也很 11/13 15:18
11F：→ c1314205:很重要! 11/13 15:19
12F：推 jethuang:macrophage cell line在做发炎反应时,pa细胞时,建议用 11/14 19:32
13F：→ jethuang:建议用刮的,用Trpsin-EDTA打的话,易诱导发炎反应!! 11/14 19:34