作者dhaphy (我真的宅爆了XD)
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标题Re: [求救] 细菌生长曲线测定
时间Thu Oct 25 15:47:38 2012
不好意思 我想承接这篇文章请教大家一个相关的问题
我也是要表现protein 用BL21(DE3)这只菌
因为实验在两个地方做 所以测菌量的方法有点不同
我想要把两边的系统统一起来 但却得到奇怪的结果 >"<
1. 在台大 --> 用分光光度计
前一天先挑一颗single colony到LB中 37度 180rpm overnight
隔天早上 取50uL加到5mL LB中 37度继续摇约1.3hr
此时用分光光度计测
600nm O.D.为0.382 (来有另一值为0.191A --> A上应该有个小圈圈)
同一菌液sample 马上on ice 移至中研院 (车程约1hr)
2. 在中研院 --> 用Nanodrop 1000
台大带来的菌液马上测 (使用cell culture mode)
600nm Abs. 0.028
Cursor Pos. 280nm Abs. 0.179
因此想请问各位大大
两边侧起来的读值 该怎麽整合会比较好??
我知道菌在冰上仍会长 所以不可能得到完全相同的读值 (毕竟机器间也有bias)
我只求我在两边做的实验不要差异太大
谢谢大家!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.57.12
※ 编辑: dhaphy 来自: 140.109.57.12 (10/25 15:49)
1F：→ skybreeze:在中研院养..... 10/25 17:10
2F：→ dhaphy:请问楼上的大大的意思是??? 我有点catch不到问题点 @@ 10/25 17:46
3F：推 alaric:菌液请摇匀 再取样, 不然, 误差很大. 10/25 20:24
4F：→ dhaphy:楼上a大您好 我有摇匀 :) 也pipetting了好一阵子後马上取! 10/25 22:09
5F：→ dhaphy:那 如果我改个方式问... 若是实验protocol要求OD达0.4以後 10/25 22:10
6F：→ dhaphy:就可以开始IPTG induction 那 用nanodrop测的哪个值就是 10/25 22:11
7F：→ dhaphy:protocol中要求的"0.4"呢? 谢谢大家!!! 10/25 22:11
8F：→ blence:真好奇中研院哪一台nanodrop可以让你放菌不怕污染？ 10/25 22:51
9F：→ blence:建议你还是在中研院找一台分光光度计,一般的OD测量是以1cm 10/25 22:52
10F：→ dhaphy:ㄜ.........所以会污染啊 @@ 那我明天乖乖去消毒 OMG 10/25 22:52
11F：→ dhaphy:谢谢楼上b大 因为我翻了nanodrop手册说可以测cell culture 10/25 22:53
12F：→ blence:石英管穿透之後的透(吸)光值做为代表,所以随着距离变长变短 10/25 22:53
13F：→ blence:OD值就会变化,但一般来说nanodrop是经过校正才能测260/280 10/25 22:54
14F：→ dhaphy:又上网查了 有人用nanodrop测菌液吸光值 就以为可以这样~昏 10/25 22:55
15F：→ blence:的吸光OD,但是测菌液并不是测吸光,而是测浊度,因此所以nano 10/25 22:56
16F：→ blence:内建的的校正公式无法把OD600反应在一般分光光度计的数值 10/25 22:57
17F：→ dhaphy:谢谢b大的指导以及提醒 我要开始忏悔了 >"< 10/25 22:57
18F：→ blence:就像ELISA reader可以测OD600,但数值也不会跟一般的范围 10/25 22:58
19F：→ blence:我不建议自做不同机器的数值转换,因为你不熟原厂的数值校正 10/25 23:00
20F：→ dhaphy:不好意思 想不要脸的再请教 该怎麽清理测过菌液的nano较好? 10/25 23:01
21F：→ dhaphy:有必要请厂商来清理吗? 还是可以自己做一些清洁(罪恶感 @@) 10/25 23:02
22F：→ skybreeze:我的意思是 何不在中研院transfer後培养至需要的OD值 10/25 23:45
23F：→ skybreeze:为何要分两地奔波 10/25 23:45
24F：→ dhaphy:回应楼上s大 因为这学期小的刚好必须回台大rotation 但有时 10/26 00:17
25F：→ dhaphy:又要赶回中研院开会或是做实验 为了抢时间 想要把在台大学 10/26 00:17
26F：→ dhaphy:的实验 有时可以利用在中研院的空档 一起做...好像太贪心:( 10/26 00:18
27F：→ dhaphy:说真的 如果可以在一边做就好 我也很想 TUT(其实是贪心 哀) 10/26 00:19
28F：→ skybreeze:而且你这样携带也不保险 今天是带BL21实验室菌株 还好 10/26 00:36
29F：→ skybreeze:哪天实验材料换成具传染性的菌株 会有触法疑虑 10/26 00:37
30F：→ skybreeze:而且你这样赶着做 中间操作变因徒增 如果不具再现性 10/26 00:39
31F：→ skybreeze:真的只是给自己找麻烦而已 10/26 00:39
32F：→ dhaphy:谢谢s大建议 我会审视一下自己实验的规划的~ 感谢喔! 10/26 01:41
34F：→ dhaphy:谢谢j大喔 :) 感谢以上的大家 给了我很多很棒的指导 感恩!! 10/26 02:42
35F：推 Nicoleching:中研院很多所得nanodrop都有规定只能测DNA/RNA 10/26 12:38
36F：→ Nicoleching:因为怕测别的没清乾净会影响读值 10/26 12:40
37F：→ Nicoleching:之前有人拿来测蛋白质结果後来测DNA时 10/26 12:41
38F：→ Nicoleching:误差就变大了（刚好有两台）因为蛋白质比较不 10/26 12:42
39F：→ Nicoleching:易清理乾净，後来还请厂商来清=_= 10/26 12:43
40F：→ dhaphy:昨天已与厂商联络 的确如楼上n大所说 蛋白较难清理 容易残 10/27 14:38
41F：→ dhaphy:留 菌液的部分厂商建议ddH2O 5uL清洗数次且时间长些即可 10/27 14:40
42F：→ dhaphy:并且昨日清洁完毕再测核酸 正常!... 谢谢各位大大给的建议! 10/27 14:41