作者greenpeace29 (修)
看板Biotech
标题[求救] ELISA standard吸光值很低QQ
时间Sun Sep 23 20:08:04 2012
我最近在测mouse血清的IL-1Ra
但是Standard吸光值越测越低 不知道为何QQ
厂商只有卖coating好一抗的 所以步骤直接从加sample开始
步骤:
加standard, sample 2.5nr→PBST洗4次
加二抗 1hr→PBST洗4次
加HRP 45min→PBST洗4次
加TMB 30min→加 stop solution 测OD450
然後我第一次pretest时std最高浓度(2000pg/ml)有1.3左右
第二次剩下0.6
第三次剩0.3(这次是用新一管的STD)
接着怀疑可能是我在溶解STD时没先离心把管壁上残余的离下所以浓度不对
(protocol有说配STD前要先briefly spin)
然後买了新kit
9/20学姐先帮我测试STD 最高浓度(2000pg/ml)有3.0
虽然画出来曲线後面已经平掉了 但表示STD很健康
9/23我做的STD却只有0.5 QQQQQQQQQQQQQQQQQ 但是sample的部分都有1.多
稀释STD时我都有vortex+pipet
我实在是不知道哪里出了问题QQQQQQQQQQQ
我真的觉得我被鬼打到了
之前练习IL-33, IgM, TNFa standard都有到1.多
稀释方法也都差不多....
可以烦请各位前辈给我点建议吗QQ?
kit很贵我却一直失败.........QQ
谢谢大家!!!!!!!(跪
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◆ From: 175.180.116.108
※ 编辑: greenpeace29 来自: 175.180.116.108 (09/23 20:09)
1F：→ goshr:再请你学姐做一次, 就知道是你的问题还是kit的问题了 ^^ 09/24 09:14
2F：推 d200190:请学姊看你做一次，看是不是有加错还是有气泡 09/24 15:11
3F：推 cutilis:sodium zide好像会影响HRP. 看一下厂商的troubleshooting 09/24 23:04