作者jykonv23 (如果有那天)
看板Biotech
标题Re: [方法] 跑SDS gel % 数选择
时间Wed Sep 19 22:28:12 2012
※ 引述《spirithorse (咩)》之铭言：
: 我的目标蛋白大约在10KDa左右
: 所以使用15% SDS gel
: 但是做WB时只需要看actin (42KDa)跟目标蛋白(10KDa)
: 而15%的gel只有大概在30KDa以下的marker会分很开
: 於是我有问题想请问...
: 因为也不是要区分"很多"10KDa左右的蛋白
: 那是否可以跑12%或10%的gel呢?? (8%我看marker 15-10KDa分不开)
: 总觉得不知道哪里怪怪的~
手工配10%/15%的下胶
配15%的胶其中H2O的部分里面含甘油20%
举例
30 % acrylamide stock 16 ml
H2O 8 ml(with 1.6ml甘油 )
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
10% SDS 8 ml
10 % APS 160 μl
TEMED 15μl
假设你的下胶体积是10ml，10%和15%的比例可以是1:1也就是各5ml
先把15%的胶注入5ml後，再把10%的胶用非常缓慢低速度沿着玻璃壁注入
你可以看到胶会有分层，或者tip尖端垂直抵着玻璃片沿着玻璃片由左向右移动
同时也是缓慢滴注入10%的胶，重点在於注入胶的速度避免混合即可
注完後你会看到因为胶对光的折射率不同，出现一条性感带
多练几次就可以抓到诀窍了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.25.62.79
1F：→ blence:为什麽要加甘油呢？分批凝就好了,另外配方少了Tris-HCl 09/19 22:55
2F：→ blence:以42,10kda这个例子,用10%+15% 1:1能会让actin跑到15%变丑 09/19 22:58
3F：→ blence:改成12%,16% 1:1或10%,17% 5:3比较能让42,10kda分布在两层 09/19 23:00
4F：推 spirithorse:第一次看到加glycerol的做法! 学到,谢谢^^ 09/19 23:02
5F：→ Invec:加甘油最早是在tricine-PAGE里，用以增加胶体强度而已 09/20 01:40
6F：→ jykonv23:配方是随便举例，主要是我用甘油取代20%的水，10%15% 09/20 08:42
7F：→ jykonv23:的比例可以改不一定要1:1，因为我不是分批凝所以15%加 09/20 08:45
8F：→ jykonv23:甘油比较稳一点 09/20 08:45