我这阵子有做三批bisulfite的PCR 第一次做try得要死才做出来 後来买了Hotstart的PCR mix 结果後来连anneling温度都不用测就可以P出专一的band 避免帮厂商打广告 如果有需要的可以站内信问我是用哪支Taq 希望可以帮到大家 ^^ ※ 引述《travelmat (草蓆)》之铭言： : 其实我也有同样问题... : 我之前也是有TRY到一个比较好的条件 : 仅管做出来一样是smear一片，但相对明显有一条专一性的band(size是我要的) : 本来预期是以为这样的condition是非常OK的 : 於是接下来的sample尝试以同样condition下去跑 : 却发现不同sample间无法重覆 : 而即使回到一开始的同样sample也无法repeat : 问过别家有在做类似实验的，学长给我回应是 : 1.我sampleDNA是GENOMIC，genomic pcr本来就很麻烦又复杂 : 2.每次的BISULFITE处理後都视为不同的sample，也就是每次都可能会有不同的condition : 3.primer suck : 所以就...... : 而我问我们老师，我们老师给的答案是 : PCR就是一项amprify的技术，所以如果你这次primer能bind到正确的位置 : 那麽他理论上就是会放大，bind的相对多，专一性片段就相对亮 : 而bind的没相对多，於是就一片smear : 简单来讲，以我的情况就是要看运气，这次运气好就有专一性这样。 : 我个人做法是把primer anealing的时间拉长，我的想法是 : 这样让primer有比较多的机率去bind到正确的片段(当然非专一性的也可能提高) : 後来用这样做法的确是相对成功率比较高.... : 不过整体来讲还是成功率非常之低....... : 目前是改成将PCR进TA，然後考虑用colony hybridization去抓哪个colony有我要的片段 : (我好想毕业阿.....) : 以上希望对你有帮助.... : 如果你有进展也请分享给我和大家.....感谢你.... --

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