作者poulnew (poulnew)
看板Biotech
标题[求救] western total Erk有趋势
时间Sun Sep 16 01:33:28 2012
小弟是新手
我跑的total Erk 一直有一个很奇怪的趋势
但是同一批sample带我的学姊跑就很正常
已经做了四次独立的实验
http://ppt.cc/zGp7 (4th data not shown)
想上来请教各位有可能的原因
以下是我的做法概述
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8%胶 60V 3小时 / transfer 100mA 50min
先压p-Erk (cell signaling,1:2000,mouse) O/N
stripping 15 min,wash 10min for 3times, blocking (5% milk) 1hr
total Erk (cell signaling, 1:2000 ,rabbit) O/N
我自己的解释是 stripping 没完全 造成total Erk抗体无法binding
但是有可能吗?? 因为我也想不到原因了 毕竟都跑了四次
礼拜一要进行无奈的第五次实验 希望各位能够救我一下
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 180.176.13.7
1F：→ utadalove:stripping完有上substract压片看看有无讯号吗?! 09/16 11:01
2F：推 Kunzite:Stripping方式？ 09/16 11:43
3F：推 hangzer:与其stripping 不如多跑一片胶分开压压看? 09/16 14:52
4F：→ poulnew:stripping 65oC /15 min 09/16 15:31
5F：推 lovenainai:不要 strip 偷懒 做了四次反而更浪费时间跟耗材 09/19 12:54