作者emomi (emomi)
看板Biotech
标题[求救]Cloning多出两个nt
时间Sat Aug 25 22:46:56 2012
最近在做Cloning...
vector和insert是以Msc I和Hind III进行enzyme digestion
Msc I会将DNA切成blunt end，辨识的切位为TGG CCA
有成功接入insert，定序之後insert的序列是完全正确的，
却发现在Msc I的切位上多出了两个GG
也就是说序列变成 TGGGGCCA，
後来我又进行了Msc I的enzyme digestion，
发现可以切的动，但是效率很差。
而且又以reverse primer定序一次，发现仍然是多了两个GG。
而且我同时送了两个plasmid都得到一样的结果。
这种发生的机率好像低到可以去买乐透了~囧。
想请教各位，
这样的结果是不是表示有非常大的机率的确是多了两个GG？
其实已经有重做的准备，
但是还是想知道为什麽会有这种情况发生，
不知道大家能不能给我一些意见。
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◆ From: 211.73.179.58
1F：→ blence:如果重接还是会这样,就得考虑这Ecoli不喜欢这颗plasmid了 08/26 04:58
2F：→ chl20020933:GG了, 用site directed mutagenesis变回来 08/26 21:40