※ 引述《adsf1105 (ㄟ )》之铭言： : 请问板上神人大大们: : 小弟弟第一次利用thermo Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Kit : 纯化出细胞的膜蛋白去跑2D，发现在跑一维时，最後在30000VHr时只跑到大约8000VHr >< : 之後和老师讨论可能是因为detergent的问题，所以第二次先利用thermoPierce SDS-PAGE : Sample Prep Kit 去除过多的detergent，但因为sample浓度不够高因此本来150ul sample : + 100 ul rehydration buffer改用250ul sample+50 ul rehydration buffer : 结果发现跑了24hr也只跑到218VHr(还在S2)，完全上不去~ : 以下是一维的program : S1 50V/strip step-n-hold 12 hr : S2 500V step-n-hold 500Vhr : S3 1000V step-n-hold 1000Vhr : S4 3000V gradient 3000Vhr : S5 5000V gradient 5000Vhr : S6 8000V gradient 8000Vhr : S7 8000V step-n-hold 30000Vhr : S8 1000V step-n-hold 12 hr : ----- : 有没有可能是我将rehydration bf 量减少的影响，导致电压上不去??? : 有没有2D高手跑过膜蛋白的经验，可以提供小弟弟一些迷津^^ 你的rehydration buffer和Lysis 是同一个吗? 我之前用是同一个 确认一下你的lysis里面的detergent是不是双电性的 而且你的应该是连第一步就没上去 50*12 就有600 Vhr了 --

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