作者adsf1105 (ㄟ )
看板Biotech
标题[求救] 2D电泳高手解惑
时间Thu Aug 2 16:56:16 2012
请问板上神人大大们:
小弟弟第一次利用thermo Mem-PER Eukaryotic Membrane Protein Extraction Kit
纯化出细胞的膜蛋白去跑2D，发现在跑一维时，最後在30000VHr时只跑到大约8000VHr ><
之後和老师讨论可能是因为detergent的问题，所以第二次先利用thermoPierce SDS-PAGE
Sample Prep Kit 去除过多的detergent，但因为sample浓度不够高因此本来150ul sample
+ 100 ul rehydration buffer改用250ul sample+50 ul rehydration buffer
结果发现跑了24hr也只跑到218VHr(还在S2)，完全上不去~
以下是一维的program
S1 50V/strip step-n-hold 12 hr
S2 500V step-n-hold 500Vhr
S3 1000V step-n-hold 1000Vhr
S4 3000V gradient 3000Vhr
S5 5000V gradient 5000Vhr
S6 8000V gradient 8000Vhr
S7 8000V step-n-hold 30000Vhr
S8 1000V step-n-hold 12 hr
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有没有可能是我将rehydration bf 量减少的影响，导致电压上不去???
有没有2D高手跑过膜蛋白的经验，可以提供小弟弟一些迷津^^
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◆ From: 140.113.173.102
1F：推 HOPEFIRE:我只是一提 现在夏天 你有让机器吹冷气吗~ 08/04 13:08
2F：→ HOPEFIRE:你的机器上面有没有水气? 08/04 13:09