作者jasmineapple (席得)
看板Biotech
标题[求救] 关於western到blocking之间的步骤
时间Sat Jul 21 16:29:31 2012
今天作western
刚刚进行完semi-dry的transfer後
就要将membrane放到 1%的牛奶blocking
配完牛奶後没有马上将牛奶放入要blocking的小盒子中
想说先放入membrane 再放入1%牛奶
只是刚rtransfer完後将胶从拿开 membrane眼看就要乾掉的fu
所以我把滤纸盖到membrane上(是membrane的正面)再加一点TBST
避免乾掉
然後把盒子加入blocking的buffer再把滤纸拿开
把membrane夹进去盒子blocking
我觉得我有点担心过头
不过还是想问各位大大
把滤纸盖到membrane正面上(滤纸本身应该还有transfer buffer在上面)
再加上TBST
这样动作会不会transfer到membrane上的蛋白质有影响?
谢谢各位
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.97.153
1F：推 hangzer:想太多了 不会 07/21 16:30
2F：→ hangzer:其实连乾掉都没关系 泡一下methanol就可以了 07/21 16:30
3F：→ popopig2000:赞同楼上 07/21 22:11
4F：推 qqmango:有些protocol还建议Transfer完要给它乾一下，再block 07/22 12:32
5F：→ tireel:同意楼上的说法，有些membrane须要先晾乾，才可做block 07/23 21:55
6F：→ tireel:所以不需要想太多。至於先在膜上覆盖沾湿的滤纸 07/23 21:56
7F：→ tireel:只要滤纸是乾净的，应该不会有影响，而且抗体照理说 07/23 21:57
8F：→ tireel:不会辨识到一些非目标蛋白，因此你无须担心 07/23 21:58