作者sylvialalala (sylvia)
看板Biotech
标题[求救] 有人用recomobination方法clone的吗
时间Thu Jul 19 22:29:31 2012
要做一个clone一直出不来（insert中间有ccdb sequence，两端序列相像）
试过传统方法，也有blunt end，但一直求不到
後来试了recombination的kit (genescript的clonEZ以及neb的gibson)
之前试其他的clone有成功过，但这次怎麽样都出不来
方法是在vector先切成linear，再用两端有vector序列的insert去recombine
我的vector是双切後做gel purify
insert pcr後有做gel purify
再根据kit做，但还是出不来阿～～～～～～～（这个clone我做了三个月阿～～～～）
想请问有用过此方法的高手有什麽该注意的地方
还有recombine的地方离切位多远就会失败？
感恩～～～～！！！！！！！！！
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◆ From: 118.166.193.9
1F：推 johanjohan:有ccdB的话，competent cell是关键。 07/19 22:50
2F：→ johanjohan:这类的kit也有Vivantis的Flex-C可以选择~ 07/19 22:51
3F：→ sylvialalala:compent cell我是用invitrogen的ccdb t1～所以应该没 07/19 23:30
4F：→ sylvialalala:问题～ 07/19 23:30
5F：→ puec2:用yeast 07/20 23:08
6F：→ puec2:E. coli recombination其实不是很稳 07/20 23:09
7F：→ puec2:然後 你弄的应该不是一般sequence吧?AT rich, repeated seq? 07/20 23:10