作者barbarlas (barbie)
看板Biotech
标题[求救]western 磷酸化蛋白染不到
时间Tue May 8 19:54:14 2012
我要染的蛋白为 Myosin Light Chain pS19
大小大约17kD
我的作法是将cell lysate收下来後直接加入SDS sample buffer煮五分钟
之後跑胶和tramsfer都没有问题
blocking是用1%BSA 2hr
一抗 overnight
二抗两小时
有用别人的sample当positive control
结果别人的sample有染到
我猜是我sample的问题,但我其他的蛋白的磷酸化染得到
我是用1XRIPA buffer(有加phosphatase inhibitor) 去收lysate
定量完後加入SDS sample buffer
这蛋白我实验常需染的蛋白
我已经不知道该怎麽办了
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◆ From: 118.167.245.116
1F：推 mesenchymal:你的protein 跟别人positive control的同细胞吗? 05/08 22:54
2F：→ barbarlas:恩 只是不同的treatment 05/09 11:25
3F：→ lail:你的treatment会不会无法使该蛋白质磷酸化? 05/10 00:21
4F：→ mesenchymal:那你的sample没有treatment的也染不到吗? 05/11 13:17