作者emulsify (Mylo Xyloto)
看板Biotech
标题[方法] pcDNA3.1 plasmid?
时间Mon May 7 23:46:37 2012
目前使用的质体是pcDNA3.1/V5-His-TOPO
实验上除了接上想ligase的片段外
还需要空的质体 但因为两端突出的都是T
在接合外来片段都做得蛮顺利的
唯独空质体试了几种方式 目前都还没成功:
1. 在原本应该加入外来片段的步骤 改加入DW
2. 改成加入dNTP
想请教版上有没有人试成功过~ 能不能指正我那边出了问题O_Q
或是那里可以改进再试试看!
或是..有没有人有pcDNA3.1/V5-His-TOPO这个质体(要完全没插入外来片段的!)
(或是TOP 10 E.coli内含这个质体也可!)
我可以附上一杯星巴克(或是价位相当的 任君挑选~)当作答谢!
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◆ From: 114.44.145.126
1F：推 tsubasawolfy:随便设计个RE site primer然後dimer起来接上去就好了 05/08 00:07
2F：→ joseph103331:楼上的方法....好棒啊!! 我也要学XD 05/08 09:06
3F：→ jabari:真是奢侈的梦想 XD~~ topo耶... 05/08 16:49
4F：→ U0:blunting and blunt end ligation 05/08 23:22