作者a213a21 (a213a21)
看板Biotech
标题[求救] MCF-7 transfection 一直失败
时间Fri May 4 18:01:21 2012
小妹最近开始做MCF-7 transfection 的实验
因为要先抓条件
所以将一个带有GFP的plasmid DNA transfect 到 MCF-7 里
使用6-well
4ul plasmid(0.5ug/ul) + 6ul lipofectamine 2000
最後的总体积是 2 ml (皆用serum free 的 DMEM/F12 )
6小时後观察
结果transfection的效率很差
在显微镜下几乎没有看到绿色萤光
在google上找到的protocol 也是效率很差
想请问板上的高手们
有人做过MCF-7的 transfection 吗??
是我的plasmid:lipo 的比例抓错吗?还是有甚麽需要改进的地方?
实验一直卡在这无法继续做下去真的很焦躁阿!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.13.115.17
1F：→ a90648:六个小时太短了.... 05/04 18:25
2F：推 TAKONA:应该六小时换medium隔天再观察吧 05/04 19:1
请问是换成complete medium 吗?
※ 编辑: a213a21 来自: 163.13.115.17 (05/04 19:37)
3F：→ a90648:是 05/04 19:45
4F：推 kevin1983:post-transfect 24~48h 是转录作用的最高峰 05/04 21:59