作者mikis1107 (mikis1107)
看板Biotech
标题[求救] 冷切包埋前先用PFA处理检体?
时间Fri Apr 20 11:16:28 2012
最近有听到一个方法是
在包埋OCT前组织先用PFA处理
要染色前section用macrowave antigen retrieval
之後再用2%的serum blocking
不知道有没有版友是用这种方式
因为最近片子上的granules实在有点多
http://ppt.cc/xR(M
实验方法之前有po过请神人校正
应该是没啥问题
有试过改善方式:
1. wash久一点--->没用
2. Fix条件更改: (1) Aceton 20% cool-->染色不均, 有杂质
(2) Aceton 100% cool->染色不均, 有杂质
*(3) PFA 4% RT--->染色较均匀, 有杂质颗粒 (现在使用)
(4) 0.4% gelatin+3% goat serum-->其他实验室提供,目前在试条件
3. 1级抗体稀释倍率: 1:200, 1:400, 1:800
^^^^^^^
现在使用
4. 2级抗体稀释倍率: 1:500
但目前似乎还是没办法解决
所以想说该不会是从一开始包埋的方式就有问题
由於是人类检体
都是由开刀房学姐帮忙包埋我再切片
现在的包埋是请学姐将组织清洗乾净後
放进装有oct的锡箔纸圆盒中
将纸盒放进含有少许isobutenal的罐子
(避免急速冷却下冰晶形成太快破坏组织)
再一起放入小型液态氮桶中
如果有较详细包埋的步骤也请好心的版友寄信给我可以吗??
谢谢T___T
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 223.139.180.67
1F：推 goshr:干嘛不用石蜡包埋呀, 反正都要retrieval了... 04/20 13:52
2F：→ mzac1b:同楼上 冻切好处是较好染 但片子很破 04/20 13:55
3F：→ mzac1b:蜡切切片美观但福马林泡过要 retrieval 就不见得好染 04/20 13:56
4F：→ mzac1b:又泡福马林又冻切 不就美观和好染两种好处都没有? 04/20 13:57
5F：→ mikis1107:所以G大M大都是用石蜡包埋染萤光吗??? 04/20 15:36
6F：→ vandia:石蜡包埋之後染IHC也不错 04/20 15:59
7F：→ mikis1107:老板想要看萤光的数据@@ 04/20 16:35
8F：→ mzac1b:都有做过 蜡切ICH 较麻烦 不过只要抗体好染虽麻烦也不错 04/20 17:12
9F：→ Nofetete:我的是老鼠的ankle 包埋前先4%PFA 4度c overnight 05/04 02:56
10F：→ Nofetete:(因为还要泡EDTA脱钙)，IHC的前处理则是用Proteinase K 05/04 02:57