作者Azusa809 (Azusa)
看板Biotech
标题[求救] total Akt的量不一
时间Thu Apr 19 02:05:45 2012
最近在做Akt的western blot时发现，
total Akt的量似乎会受处理影响(induced apoptosis)，
但理论上处理应该只会影响Akt的活化量，
(每个lane间loading control-actin的量也一致)
看paper上total Akt的量都一样，
实在不知道是他们的处理不会影响total Akt，
还是跑胶後，重新调整过total Akt的量。
不知道有没人有经验在压p-Akt和total Akt时遇到类似的问题呢?
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.121.5.64
1F：推 aggaci:actin一样吗 04/19 11:08
2F：推 FireHell:total包含phospho，phospho有变动理论上total就会有变动 04/19 12:46
3F：→ FireHell:只是因为常常non-phospho比phospho多很多，所以total看起 04/19 12:47
4F：→ FireHell:来没差。也就是说，total有变动是没关系的 04/19 12:48
5F：推 FireHell:可能你的细胞本身Akt就不多，所以total看的出差异 04/19 12:50
6F：→ blence:P有变动理论上total就会变动？ total只是P与non-P的总合阿 04/19 13:48
7F：→ blence:要是total是随着phospho变化，那phospho就这件事就不重要了 04/19 13:52
8F：推 FireHell:抱歉我想修正"理论上"这三个字，用的不恰当 04/19 15:29
9F：→ FireHell:应该说"有可能"，我们必须考虑转译出新的non-p的可能性 04/19 15:31
10F：推 FireHell:整理："T不变、P有变" 和 "T随P而变(同增同减)" => 合理 04/19 15:38
11F：→ FireHell:後者如果遇到non-P可"抑制"，P可"促进"的情形 04/19 15:38
12F：→ FireHell:可以用P/T ratio的定量结果去解释 04/19 15:38
13F：推 FireHell:如果non-P"无功能"，P可"促进"，只看P的结果即可 04/19 15:43
14F：→ FireHell:前提当然是loading control药一样 04/19 15:44
15F：推 FireHell:最简单的作法是，全部都用P/T raio去看搂，不过定量挺 04/19 15:48
16F：→ FireHell:麻烦的 04/19 15:48
17F：→ Azusa809:total actin是接近一样的! 我目前也是采用定量看ratio 04/19 22:42
18F：→ Azusa809:去看差异，只是纳闷是只有我这样~还是这情形普遍会发生~ 04/19 22:43
19F：→ mesenchymal:有时候是因为你apoptosis太严重造成 04/19 23:14
20F：→ mesenchymal:actin讯号强所以看不出太大差异,但AKT就会有差 04/19 23:14
21F：→ mesenchymal:另外推F大的 P/T ratio 04/19 23:15
22F：推 FireHell:我也有几个PROTEIN会这样，不过不是Akt 04/19 23:37
23F：→ Azusa809:谢谢大家的帮忙~那我就先用ratio看了~请问大家遇到这种 04/20 00:15
24F：→ Azusa809:情形，若是有发表需要，是不是就直接按照total Akt量调整 04/20 00:17
25F：→ Azusa809:loading，再跑出漂亮的结果呢?? 04/20 00:17
26F：推 FireHell:不行啊，loading的protein量一定要一样 04/20 00:20
27F：→ blence:要怎样调整或定量校正，取决於你要强调的点,因此有些data 04/20 00:24
28F：→ blence:不放loading control而用total取代以强调phospho的差异 04/20 00:25
29F：推 ararthur:我有遇过 可以考虑drug treatment时间短些 04/20 13:06
30F：→ ararthur:对於mRNA Protein的变化 Post-modification 更能在短时间 04/20 13:06
31F：→ ararthur:内看到变化 所以如果很坚持想让tAKT一样 那就别treat太久 04/20 13:07
32F：推 raiyu:感谢大家的讨论 我也遇到类似的问题 04/20 23:20
33F：→ Azusa809:谢谢大家帮忙!我会先再尝试看RATIO或把处理时间缩短看看 04/21 22:18