作者imoomin (auto)
看板Biotech
标题[方法] 纯化蛋白之透析及浓缩
时间Wed Apr 11 18:52:24 2012
大家好呀 !
小弟使用affinity column进行蛋白质纯化
蛋白质分子量 11 kDa
elute後蛋白质溶於buffer(20 mM Tris-Hcl;500 mM NaCl;1 mM EDTA;50 mM DTT)
欲去除杂蛋白以及DTT和盐类并进一步浓缩.冻乾以便後续的细胞测试
实验室有3.5K透析膜. 冻乾机. vivaspin(5K 和 30K)
目前计画:1.以30K vivaspin过滤去除杂蛋白
2.透析去除DTT和盐类
3.使用5K vivaspin浓缩蛋白液
4.Bradford法测定蛋白浓度并分装每次使用的量
5.冻乾
6.回溶.细胞测试
请问这样实验流程的安排是否恰当 ? 或有更好的建议吗 ?
欲进行细胞测试,请问我要使用什麽溶液将冻乾的蛋白粉末回溶呢 ?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.97.175
1F：推 alaric:2. 大量浓缩, 过desalt column 04/13 01:29
2F：推 lyu0001: 补充楼上-浓缩後再加buffer稀释再次浓缩 04/13 18:07
3F：→ lyu0001:细胞测试用记得0.22um过滤 04/13 18:08