作者jasmineapple (席得)
看板Biotech
标题[求救] 关於semi-dry 小分子transfer
时间Sat Mar 31 16:46:04 2012
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
想请教各位大大
以前western我只用过湿转的方式
不过现在我要用的是semi -dry
第一次用semi-dry时不是很熟悉 我要看的蛋白质大小约17kDa
那时候使用15v 30min 後来transfer完看到效果不好 ( 就是大分子的marker没有过去
但是小分子约10KDa附近都有过去) 所以我又继续给他tran了30min 所以这次的条件为
15v 60min 後来时间一到还是有一些大的
marker没有过去 我想应该是气泡的关系造成这样的结果 不过因为我要看的蛋白大小ma
rker友过去(约15KDa ,10kDa )
所以我就继续往下面的步骤了(blocking...1AB)而这次结果虽然有压出band 不过
不是我预期的结果 所以我又重新制备sample
後来这次tranfer我就follow第一次作的条件 15v 60min 这次也有避免有气泡
後来transfer大分子过去了 但是我小分子15kDa 10kDa的marker却没有在membrane上
想请问各位大大 是因为小分子跳海了吗(是否transfer太久)? 我是不是应该把
时间调短15v 30min 或15v 15min 哪一个比较适合呢? 谢谢各位大大
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.97.153
1F：→ keepseaching:照你的叙述似乎不像是时间的问题 04/01 12:03
2F：→ keepseaching:是不是你的membrane没压好？？ 04/01 12:03
3F：推 doban:我的蛋白10kDa 我semi-dry条件设定电流(滤纸面积*0.8) 60min 04/01 15:23
4F：→ jasmineapple:第二次作时有很注意是否有气泡的问题 所以加一层滤纸 04/02 12:22
5F：→ jasmineapple:都有用管子噜一噜 把气泡赶走 04/02 12:24
6F：→ jasmineapple:所以应该是不会没有压好 我想 04/02 12:25
7F：推 stormcorn:我觉得是小分子跳过头了.... 04/05 22:51
8F：→ jasmineapple:楼上 我也觉得是耶 我有爬文 有人说厂商建议15v 04/06 15:37
9F：→ jasmineapple:15min 或是10v 30min 果我用後者的条件 结果小分子 04/06 15:37
10F：→ jasmineapple:的marker步见了 只剩下大分子的marker 04/06 15:39
11F：→ jasmineapple:而且膜後的那张纸 有淡淡的marker 04/06 15:39
12F：→ jasmineapple:这样该改甚麽样的条件好呢? 04/06 15:40