作者betouched (上上下下)
看板Biotech
标题Re: [求救] FPLC injection 已修改并详述步骤
时间Thu Mar 22 08:29:22 2012
update 资讯与方法,我的FPLC都没有出现peak 不知道问题在哪里
用打的描述方法有点困难,所以我将照片上传到dropbox
http://0rz.tw/lHY8Y 这是我打出来的图,UV是那很杂的那条,杂讯很大,没辙
http://0rz.tw/oCOoA 方法前半段
http://0rz.tw/YoFue 方法後半段
http://0rz.tw/aQpOI Gradient 曲线
http://0rz.tw/hVfWp 前人留下来的图,打出来应该要长这样
我是在run方法之前.就先inject sample
我手动将 injection valve 转到 inject 然後打1ml 0.2mg/ml 的sample
再转到 load 然後按下 run
ps.由於实在都没有peak 所以我连,先 load 在 inject 都玩过了
Setup Lamp Run Time 显示
Hg 22218h
其实我一直认为是 Lamp 问题,使用说明书上写的是 run time
我的认知是,灯泡使用时间,所以我认为Lamp已经该换了
可是我这边的博後
坚持说他之前才换过,那是倒数时间
这个博後,我真的有说不完的想骂他的话
觉得还是自救比较快
使用的仪器
Pump P-920
UPC-900
※ 引述《betouched (上上下下)》之铭言：
: 之前用FPLC的学长姐不见了之後我才进实验室
: 现在一个人在努力学习怎麽用这个仪器
: 仪器 AKTA FPLC
: 软体 Unicorn
: Column : resource Q 1ml
: Method:沿用前人的 method
: 1. wash by water
: 2. wash by protein solution AB for 20 min
: 这期间我用 protein solution A 洗了 sample loop (2ml)
: 然後 inject sample into sample loop for 1 ml (0.25mg/ml)
: 有确定此时 InjectionValve 是block住的
: 3. injection
: 这里萤幕上显示不是很明了
: 0.02min InjectionValve inject
: 0.02min Block Sample_Injection
: 0.02min Base Volumn
: 2.02min End Block
: 2.02min InjectionValve Load
: 2.02min End Block
: .
: .
: .
: 4. Gradient B from 0-100% for 40 min
: 标准品应该在20分钟左右出来<可是UV还是保持在0上下跳动
: 5. 哭哭
: 一个人看着 FPLC 使用说明书,东弄弄西弄弄得,真是头大,来个人帮帮我吧 哭哭
: ◆ From: 147.126.101.168
: 推 bluep:简述一下你的column和method, 大家才有办法帮你找问题 03/16 14:32
: ※ 编辑: betouched 来自: 147.126.101.168 (03/17 02:10)
: 推 iosteven:这一台操作 很简单= ="你的动相 梯度 方法 跟目的等资讯 03/17 13:39
: → iosteven:要说明白才可以帮你^^，基本上设定好固定时间收吸收峰 03/17 13:40
: → iosteven:的样品，是最简单的目的，是要纯化或分Fraction..... 03/17 13:41
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 147.126.101.169
1F：→ trumpet:这样的图就算有peak你也看不出来，看起来像是灯没开的样子 03/22 08:58
2F：→ trumpet:method的部分没看到设定波长的选项?! 03/22 09:02
3F：→ betouched:这就是诡异的地方,找不到任何地方可以设定波长 03/22 13:27
4F：→ betouched:说明书只有讲波长根据什麽灯<仪器部分只告诉我 03/22 13:32
5F：→ betouched:这是Hg灯,找不到地方有显示波长,Method不知道哪里可以设 03/22 13:35
6F：→ betouched:对了,Lamp显示 on 03/22 13:36
7F：→ Marriott:UPC-900好像波长不能变,unicorn操作介面就没有波长的选项 03/22 19:41
8F：→ Marriott:UV-900就可以 03/22 19:42
9F：→ betouched:看来应该是UV坏了 QQ 03/23 04:47
10F：推 alaric:过大量的水, 到稳定值, 再过buffer + 1M NaCl, 洗到稳定. 03/26 23:56
11F：推 alaric:请确定 Inj mode VS. Load mode , 何时才可以Load Sample? 03/27 00:01
12F：→ alaric:你要把Inj及Load mode的流路图看懂, 就知何时该Loading. 03/27 00:03
13F：→ alaric:另外, 你要确定你的A, B buffer 没配错及放对管子. 03/27 00:05
14F：→ betouched:谢谢楼上提醒, ^^ 03/27 01:39
15F：推 missal:上次我们实验室lamp挂点之前也是有这种情况 03/29 12:36
16F：→ missal:如果那些杂讯不是因为空气的话 确认一下fraction collector 03/29 12:37
17F：→ missal:里有没有液体? 另外如果是lamp的问题我们之前打去GE问过 03/29 12:37
18F：→ missal:你可以用热水洗洗看...或是用1M NaOH看看.... 03/29 12:39