最近在试用一个新的kit 主要是从全血同时将DNA和RNA粹取出来 步骤和抽DNA的时候类似 如果要DNA或RNA其中一种 就在利用DNase或RNase去除不要的东西 结果出来後 利用nano-drop测其浓度 DNA或RNA的260/280的值都奇高无比 DNA大约是4 RNA甚至有高到9 我大概查一下 似乎是因为酒精残留 但是我已经在hood风乾2个小时了 值还是这麽高 我们实验的目标是RNA 因此我主要希望是RNA够纯 才可以做接下来转cDNA的步骤 我看到网路上的资料有提到RNA的260/230的值也要留意一下 建议260/230的值要高过1.8 而我的260/230都不到0.1... 搜寻一下是因为有盐类等的干扰 但是不晓得要怎麽debug.... Orz 这次我试的sample是用paxagen kit fix过RNA的全血 但是他已经放了快5年了.... @@ 我不晓得这样的sample是不是也会影响结果? 麻烦板上的高手帮我debug >_< 谢谢!! 以下是我的实验步骤: AquaPreserve/Prosink皆为这个kit的reagent 1. Pre-warm the AquaPreserve solution to 22-37℃ 2. Add 250 μl AquaPreserve to 250 μl whole blood in a 1.5 ml microfuge tube 3. Vortex until frozen blood-AquaPreserve thaw completely 4. Add 125 μl Prosink and vortex 1-2 min 5. Incubate 22℃ for more than 30 min 6. Centrifuge 14,000 xg for 10 min to pellet the proteins 7. Transfer 0.5 ml supernatant to a new 1.5 ml tube 8. Add 0.4 ml isopropanol to (7) and shake/vortex for 30-60 sec 9. Centrifuge at 14,000xg for 10 min to pellet the DNA/RNA 10.Decant to discard supernatant and gently add 50% isopropanol or 70% ethanol to fill up the tube 11. Decant to discard the alcohol solution 12. Tap the tube on a paper towel to remove residual liquid 13. Leave it upside down to air dry the DNA/RNA pellet for 5-10 min 14. Add 100 μl deionized water to the DNA/RNA pellet and vortex to solubilize the DNA and RNA 15. Add DNase and incubate 22~37℃ for 20 min 16. Incubate at 65℃ for 30 min to inactivate DNase --

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