作者enicole (中智˙禅˙生活)
看板Biotech
标题[讨论] real time PCR之定性结果判定
时间Tue Mar 13 22:39:42 2012
虽然real time PCR的强项在於定量
但是蔽实验室也把它拿来作PCR检测时的double check
最近操作上有壹些问题想跟各位前辈讨论讨论
第一是关於primer dimer的问题
如果melt curve的两个peak出现在70及80度左右，80度的讯号较弱，
是否80度的部分应为非特异性产物而不是primer dimer?
印象中primer dimer应该是在温度较低的时候出现，不知道这样的观念是否正确
第二是使用的reagen问题
taqman的特异性是高於sybrgreen的，这个是肯定的
但是有产品专员表示taqman不会产生primer dimer，所以不需要确认melting curve
在我的认知是taqman特异性高，确实不容易产生非特异性产物，但是也不是都不会出现
而且melting curve应该不是只有拿来看primer dimer的问题吧~
请问各位前辈关於以上两个观念是否正确呢?谢谢指教!
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偶开天眼觑红尘
可怜身是眼中人
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◆ From: 114.37.252.42
1F：推 jabari:1. 跑胶或单纯拿切胶的pcr产物run meltingcurve 03/14 04:10
2F：→ jabari:2.taqman用probe 不会跟dimer有关系。melting curve HRM强 03/14 04:11
3F：→ jabari:在可以作SNP或hetero/homezygotes预测分型 03/14 04:12