作者euphonium15 (心动梦幻)
看板Biotech
标题[求救] 养大肠杆菌的问题
时间Sat Mar 10 10:17:45 2012
各位板友好：
这次是小弟第一次养细菌，不过实验失败了T ^ T
实验是养大肠杆菌，从-80度冰箱取100 uL的大肠杆菌溶在5 mL LB里面。
之後放到恒温培养箱里面，37度、200 rpm培养8小时，结果溶液超清澈Orz
想请教一下，因为实验室没有-80度冰箱，因此是寄放在其它实验室。
做实验前会将细菌取出，放到实验室-20度的冰箱保存。
开始实验时则会转到一般冰箱上方的冷冻库预备。
不过因为一些因素摆了一天左右的时间，不知道这样是否会造成细菌死亡？！
仔细想了整个实验过程，觉得应该是温度的因素造成细菌死亡，溶液才会超清澈。
不然就是从-80度冰箱取100 uL的大肠杆菌的时候，因为没有做抽吸的动作混合溶液。
造成其实我只抽到100 uL的甘油，不知道这有没有机会发生？！
本来今天要再做一次实验来验证一些推测，不过对方实验室没开门。
拿不到细菌做实验，只好先来这边问有经验的板友，希望可以提供一些意见。
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◆ From: 1.169.175.227
1F：推 crazybrian:抗生素确定一下有没有加错? 可以养12-16小时! 03/10 12:11
2F：→ crazybrian:要养菌时直接从-80度挖点菌拿就好 不用等菌退冰! 03/10 12:13
感谢C大，的确有人建议我直接挖，不用这样缓慢升温。
3F：→ puec2:冻菌的时候有没有加glycerol? 03/10 15:59
回覆P大，这点应该是没有问题才对。
4F：推 qiet:100ulin 5ml八小时应该会有了 会不会没冻好? 甘油和菌有无混 03/10 16:46
5F：→ qiet:匀 03/10 16:47
Q大您好，这点我就没办法确定，个人就是担心没有混匀XDDD
6F：推 icome:原本菌液就有问题了吧 E.coli随便沾一下就会长了 03/10 17:42
7F：→ turtle24:就算不匀也不可能只抽到甘油连一只细菌都没沾到呀 03/10 19:38
关於这点，得到的溶液确实非常清澈Orz
感谢上面的板友帮忙，这两天会再重复做一次实验。
实验室还有其它管可以使用，小弟会拿其它管及有问题的那管一起测试。
主要是想厘清哪个环节有问题，避免重蹈覆辙。
其实还是比较担心温度的问题，下次会直接从-80度取出使用^^
※ 编辑: euphonium15 来自: 1.169.175.227 (03/10 21:41)
8F：推 Realthugz:做抽吸的动作死更大吧... 03/10 21:46
请教R大，为什麽会死更大呢？！
9F：→ Realthugz:出了放到冰上一下下 没人像你那样退冰的... 这麽搞刚 03/10 21:48
另外就是放到冰上的意思应该是做之前，放到冰块里面对吗？
10F：→ Realthugz:最有可能是抗生素或那管菌/整盒都坏掉了 03/10 21:49
※ 编辑: euphonium15 来自: 1.169.175.227 (03/10 22:08)
11F：推 Ianthegood:抗生素+1 一抠赖没有那麽容易死 03/10 23:44
12F：推 dodomilk:抗生素+1 e.coli只要沾到一颗就会长 03/11 16:06
13F：→ dodomilk:退冰过程根本没差 别说-20度 4度C放一个礼拜都不会怎样 03/11 16:07
14F：→ blence:说抗生素问题,除非拿错了,否则就算只是坏了为何长不起来 03/11 16:13
15F：→ dodomilk:就是说拿错了啊...原po的菌是从别的实验室拿来的 03/11 16:27
虽然说是放在别的实验室，不过有自己实验室专属的盒子应该是不会拿错^^
16F：→ dodomilk:搞不好别的实验室建构的construct用的抗生素不一样 03/11 16:28
17F：推 joseph103331:就不要加抗生素养养看嘛 又花不了多少时间= =" 03/11 17:48
实验室有配好的LB溶液，取5 mL之後加入100 uL的E.coli甘油溶液後，理论上就会生长。
关於上面几位板友提到的抗生素，小弟真的不太清楚，这点自己会先去查查文献。
※ 编辑: euphonium15 来自: 1.169.175.227 (03/11 18:21)
18F：推 lyu0001:是谁教你这样养细菌的... 03/11 19:05
19F：推 leoblack:.......天啊~怎麽这样养菌的?! 03/11 19:33
20F：推 leoblack:有一本书叫做molecular cloning,请好好地查阅一下= =" 03/11 19:36
两位板友好，自己实验室本来就不是专长於细菌这一块领域。
不过还是有部分学生从事这方面研究，本是想说他们都养的起来应该是没甚麽问题才对。
※ 编辑: euphonium15 来自: 1.169.175.227 (03/11 20:53)
21F：推 whatc21:确定好实验室配的LB有没有加抗生素,若没有的话,你的无菌操 03/12 00:31
22F：→ whatc21:作真的是挺优秀的@@a 03/12 00:31
23F：推 whatc21:如一楼大大所说,你可以养久一点,我们实验室都养到16-18hr 03/12 00:34
24F：推 dodomilk:实验室有配好的LB 然後不晓得要加抗生素 03/12 05:52
25F：→ dodomilk:带你做实验的人应该拖出来骂一下 03/12 05:52
26F：→ dodomilk:几乎每个实验室都会养e.coli，跟专长是不是在细菌没关... 03/12 05:53
27F：→ dodomilk:我想你们实验室已经配好的LB应该是加了抗生素 03/12 05:55
28F：→ dodomilk:但是你要养的菌对这种抗生素没有抗性 所以长不起来 03/12 05:55
29F：推 philip1205:不用画盘? 03/12 12:20
30F：推 lyu0001:找人教比较快，最好是看哪个实验室愿意让你在旁边看怎麽做 03/12 15:00
31F：→ lyu0001:真的不是三言两语就可以说得清楚的 03/12 15:01
32F：推 icome:原PO感觉很菜 大家不要太凶啦XD 03/12 20:58
33F：→ icome:找个有经验的人问一下 在这边很难搞懂你的问题出在哪 03/12 20:59
感谢楼上几位，小弟真的很菜>"<
※ 编辑: euphonium15 来自: 140.114.45.131 (03/19 21:33)